ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
Пензенский государственный педагогический университет
имени В. Г. Белинского
Факультет Кафедра
| Естественно-географический | Биохимии |
ДИПЛОМНАЯ РАБОТА НА ТЕМУ:
Исследование уровня цитокинов у больных
с гнойно-воспалительными заболеваниями
Студент__________Акишина Ю. В.
Руководитель___ _Фирстова Н. В.
_____________________Дружинина Т. А.
К защите допустить. Протокол №
от «_____» ____________2008 г.
Зав. кафедрой______Генгин М. Т.
Пенза, 2008 год
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Цитокины
1.1.1.Клетки-продуценты цитокинов
1.1.2.Рецепторы цитокинов и механизм действия цитокинов на клетку
1.1.3.Классификация цитокинов по механизму действия
1.1.4.Интерлейкин-4
1.1.5.Гамма-интерферон
1.2. Гнойно-воспалительные заболевания
1.2.1.Фурункулез
1.2.2.Остеомиелит
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови.…
2.2.2. Метод определения уровня гамма-интерферона в сыворотке крови
2.2.3. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем иммуноглобулина Е при хроническом рецидивирующем фурункулезе
3.1.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом
3.1.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом
3.2. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем иммуноглобулина Е при хроническом остеомиелите
3.2.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом
3.2.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом рецидивирующем фурункулезе
4.2. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом остеомиелите…
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БПС (STP) – белки-переносчики сигнала
ГВЗ – гнойно-воспалительные заболевания
Г-КСФ – гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
ГМ-КСФ– гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ГКГ – главный комплекс гистосовместимости
ИЛ, IL – интерлейкин
ИФН, IFN – интерферон
ИФНγ – интерферон-гамма
ЛПС – липополисахарид
М-КСФ – макрофагальный колониестимулирующий фактор
О – остеомиелит
ПСАТ(STAT, от англ. Signal transducers and activators of transcription) – переносчикисигналаиактиваторытранскрипции
ТМБ – тетраметилбензидин
Тх – Т-хелперы
ФНО – фактор некроза опухоли
Ф – фурункул
ХРФ – хронический рецидивирующий фурункулез
- внести в список: Кетлинский С.А. // Роль Т-хелперов типов 1и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / Иммунология, 2002. - том. 23. - № 2. - С.77 - 79.
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Медуницын Н.В. // Цитокины и аллергия, опосредованная IgE / Иммунология, 1993. - № 5. - С.11 - 18.
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Акжигитов Г.Н., Галеев М.А., Сахаутдинов В.Г., Юдин Я.Б. Остеомиелит, М.,Медицина, 1986, с.23-28
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Белохвостикова Т.С., Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите./Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с.228-229.
- выверять литературу‚ затем убрать висячие строки‚ затем выверять страницы содержания и текст диплома
ВВЕДЕНИЕ
Гнойно-воспалительные заболевания (ГВЗ) остаются одной из актуальных проблем современной медицины. Так 1/3 всех хирургических больных – это больные с гнойно-воспалительными осложнениями. В дерматологической практике на долю гнойно-воспалительных процессов приходится 29% случаев, а у детей 37% всех кожных заболеваний.
Иммунология ушедшего столетия, как известно, была богата новыми основополагающими фактами, благодаря которым она стала одной из центральных медико-биологических наук современности. К числу фактов, которые были положены в основу развития одной из важнейших областей иммунологии – учения о медиаторах иммунитета – относится и комплекс данных, появившихся еще в 60-х годах прошлого столетия и сформировавшихся в настоящее время в учение о цитокинах.
Огромное количество имеющихся и постоянно пополняющихся данных, новые и подчас неожиданные факты, не прекращающий увеличиваться перечень различных цитокинов, идентификация их рецепторов и соответствующих генов, описание каскада молекулярных основ лиганд-рецепторных взаимодействий – далеко не полный перечень фактов, которые иллюстрируют масштабность этого направления исследований.
Параллельно с развитием фундаментальных исследований, практически с такой же стремительностью началось и использование определения цитокинов в клинике при самой разнообразной патологии, и сейчас практически невозможно назвать патологию, которая не была бы предметом изучения цитокинов.
Определение цитокинов в клинике преследует различные цели: оценку тяжести течения процесса, эффективности терапии, прогнозирование и др. К сожалению, предпринимаются и попытки использования определения цитокинов для диагностики, что в настоящее время пока не обосновано.
Цель нашей работы состояла исследовании уровня интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови при хроническом рецидивирующем фурункулезе и хроническом остеомиелите у больных с разным уровнем общего иммуноглобулинаЕ.
В связи с поставленной целью были определены следующие задачи:
1. Освоить методику двухсайтового иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием набора "ИФА-IL-4" и "ИФА-IFN-gamma" для определения интерлейкина 4 и гамма-интерферона соответственно в сыворотке крови.
2. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим рецидивирующим фурункулёзом на фоне повышенного уровня иммуноглобулина Е.
3. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим рецидивирующим фурункулёзом на фоне нормального уровня иммуноглобулина Е.
4. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим остеомиелитом на фоне повышенного уровня иммуноглобулина Е.
5. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим остеомиелитом на фоне нормального уровня иммуноглобулина Е.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.2. Цитокины: общие сведения
Термин предложен С. Кохеном в 1974г.
Цитокины – группа гормоноподобных белкови пептидов, с молекулярной массой от 8 до 90 кДа, часто гликозилированных, синтезируемых и секретируемых клетками иммунной системы и другими типами клеток.
От гормонов цитокины отличаются лишь частично: они продуцируются не железами внутренней секреции, а различными типами клеток; кроме того, они контролируют гораздо более широкий спектр клеток-мишеней по сравнению с гормонами.
Разнообразные биологические функции цитокинов подразделяются на группы [ПерцеваТ.А., КонопкинаЛ.И. Интерфероны и их индукторы //Український хіміотерапевтичний журнал. – 2001. ‑ №2. – С. 62-67.]:
· они управляютразвитием и гомеостазом иммунной систем;
· осуществляют контроль за ростом и дифференцировкой клеток крови(системой гемопоэза);
· принимают участие в неспецифических защитных реакциях организма, оказывая влияние на воспалительные процессы, свертывание крови, кровяное давление;
· цитокины принимают участие в регуляции роста, дифференцировки и продолжительности жизни клеток, а также в управлении апоптозом.
По структуре выделяют несколько разновидностей молекул цитокинов, каждый из которых кодируется собственными генами. Состоят цитокины из одной – двух, реже более, полипептидных (гомо- и гетерологичных) цепей (мономеры, димеры, тримеры)‚ с молекулярной массой от 8 до 90 кДа, в основном 15-35 кДа. Подавляющее большинство из них в качестве характерного структурного элемента содержит 4 α-спирали и лишь для немногих (ИЛ-1, ФНОβ, трансформирующий фактор роста) характерно преобладание β-слоистой структуры.
1.1.1. Клетки-продуценты цитокинов
Можно выделить 3 относительно автономные группы клеток – продуцентов цитокинов (табл. 1). Это
· стромальные соединительнотканные клетки, которые вырабатывают цитокины и ответственны преимущественно за гемопоэз;
· моноциты/макрофаги, которые являются продуцентами цитокинов – медиаторов воспаления;
· лимфоциты, вырабатывающие лимфокины, которые обеспечивают развитие антигенспецифической составляющей иммунного ответа.
Таблица 1.
Основные типы клеток – продуцентов цитокинов
| Клетки-продуценты | Индукторы цитокинов | Кинетика выработки | Продуцируемые цитокины |
| Стромальные клетки (фибробласты, эндотелиальные клетки) | Контактные взаимодействия, бактериальные продукты | В пределах часа мРНК, через 3-4ч пик секреции цитокинов | ГМ, Г, М-КСФ; ИНФβ, ИЛ-6,7,8,11 |
| Моноциты/макрофаги | Бактерии и их продукты, полиэлекролиты, форбловые эфиры | В пределах часа мРНК, через 6-14ч пик секреции цитокинов | ИЛ-1,6; ФНОα, ИЛ-10,12,15; ГМ, Г, М-КСФ, ТФРβ, ИНФα, хемокины. |
| Tх1 | Связывание антигена/митогена через TCR-CD3/CD28+ИЛ-12 | Через 5-8 часов мРНК, через 10-48ч пик секреции цитокина | ИЛ-2, ИНФγ, ФНОα и β, ИЛ-3, ГМ-КСФ, хемокины |
| Tх2 | Связывание антигена/митогена+ИЛ-4 | Через 5-8 часов мРНК, через 24-48ч пик секреции цитокинов | ИЛ-4,5,6,9,10,13,3; ГМ-КСФ, хемокины |
Все клетки-продуценты цитокинов характеризуются своим собственным типом ответа на активирующие воздействия и природой активаторов, а также собственным, хотя и значительно перекрывающимся набором продуцируемых ими цитокинов (табл. 1) и теми процессами, реализацию которых они обеспечивают. [Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines Cell, 76, 241 - 251, 1994 Review ]