++++ (4 креста)- полное отсутствие гемолиза;
+++ (3 креста)- гемолиз 25% эритроцитов;
++ (2 креста)- гемолиз 50% эритроцитов;
+ (1 крест) - гемолиз 75% эритроцитов;
(минус) - полный гемолиз.
Диагностическим титром сыворотки считают разведение ее 1:10. При задержке гемолиза эритроцитов в этом разведении сыворотки на ++++ и +++ реакцию считают положительной независимо от результатов реакции с сывороткой в разведении 1:5.
При задержке на ++ и + реакцию считают сомнительной, если задержка гемолиза в разведении сыворотки 1:5 соответствует ++++ или +++.
Во всех других случаях реакцию считают отрицательной.
Патологоанатомическое исследование.
Болезнь протекает с образованием гранулем в легких, на слизистой оболочке носовой полости, гортани, трахеи, на коже, в других органах и тканях с поражением лимфатических узлов. Гранулемы могут подвергаться распаду с образованием рубцующихся язв.
При исследовании вначале осматривают кожный покров животного, разрезают обнаруженные узлы. Затем труп вскрывают без снятия кожи, осматривают слизистые оболочки органов дыхания, обследуют легкие, печень, селезенку, лимфатические узлы головы и других органов.
На слизистых оболочках обнаруживаются узелки, язвы с красным ободком или рубцы, в паренхиматозных органах - светло-серые узелки разной величины, при этом часто изменения наблюдают одновременно и в регионарных лимфатических узлах.
Поражения легких могут быть в виде милиарных узелков, а также в форме мелких и крупных очагов (ацинозная, ацинозно-надозная лобулярная или лобарная пневмания), иногда с кавернами. Обнаруживается также саловидные участки склероза ткани.
Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, плотны, могут содержать обызвествленные инкапсулированные узелки, или быть на разрезе однородными, без рисунка, серо-белого цвета. Нередко наблюдается воспаление окружающей узел клетчатки (периаденит) с образованием общего плотного фиброзного узла.
Бактериологическое исследование.
Бактериологическая диагностика включает культуральное и биологическое исследования биоматериала. Для исследования используют подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средостенные лимфатические узлы носовую перегородку, гортань,глотку, трахею, а также измененные участки легкого, печени, селезенки, кожи с подкожной клетчаткой.
·Культуральное исследование.
Из биоматериала делают высев с помощью пастеровской пипетки с грушей или шприца с длинной тонкой иглой (отдельного для каждого органа) в МБП и на МПА с 2-4% глицерина (МПГБ, МПГА), рН 6,8-7,0.
Посевы инкубируют при температуре (37-38)гр.С. Рост обычно появляется на 2-4 сут.
При росте возбудителя бульон мутнеет, на дне появляется слизистый серо-белый осадок, поднимающийся штопором при встряхивании пробирки; некоторые штаммы образуют пристеночное кольцо или пленку на поверхности бульона.
На агаре возбудитель сапа растет в виде гладких полупрозрачных колоний серовато-белого цвета с перламутровым оттенком, сливающихся затем в слизистой налет на поверхности среды.
Для идентификации возбудителя выделенную культуру микроскопируют, мазки окрашивают по Граму, синькой Леффлера (старой) или по Романовскому-Гимза, пересевают на картофельную среду Павловского, обезжиренное молоко, определяют подвижность в висячей капле, а также исследуют в реакции агглютинации на стеле с сапной сывороткой, взятой в разведении 1:10.
Возбудитель сапа представляет собой тонкие зернистые грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно или короткими цепочками. При окраске по Романовскому-Гимза и синькой Леффлера отмечают хорошо выраженную зернистость.
При выращивании на картофельной среде Павловского через 2-3 сут. Появляются мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, которые затем сливаются, образуя слизистый "медовый" налет. Цвет налета меняется от янтарно-желтого в первые 3 сут. Роста до буро-коричневого и красноватого к 6-8 сут.
Возбудитель сапа медленно (на 8-14 сут.) свертывает молоко, неподвижен. Следует отметить значительное выраженное броуновское движение клеток возбудителя в висячей капле.
Большинство штаммов агглютинируется сапной сывороткой.
Выделенную культуру исследуют на биологические свойства.
·Биологическое исследование.
Из отобранных участков биоматериала одновременно с посевом готовят суспензию путем растирания тканей с физиологическим раствором в ступке с соблюдением условий стерильности и вводят подкожно в области шеи трем хомячкам-самцам в дозе 1 куб.см, или трем морским свинкам-самцам в дозе 3 куб.см.
Выделенную из биоматериала культуру вводят двум хомячкам или двум свинкам в тех же дозах.
Срок наблюдения за зараженными хомячками - 12 суток, морскими свинками - 25 суток.
При наличии в биоматериале возбудителя сапа в месте подкожного введения через 3-4 суток образуется язва с уплотненными краями. Больные животные малоподвижны, у них развивается ринит, конъюнктивит, орхит.
Гибель хомячков при достаточной дозе и вирулентности возбудителя наступвет через 5-7 сут., морских свинок - через 8-17 суток. У морских свинок заболевание может перейти в хроническую форму.
Животных с клиническими признаками болезни усыпляют эфиром, вскрывают и проводят высев из сердца, селезенки, печени, семенников на питательные среды, затем исследуют выделенную культуру, как указано в Аналогично поступают с павшими зараженными животными в легких, семенниках обнаруживают геморрагические и некротические узелки.
Гистологическон исследование.
Для гистологического исследования берут измененные кусочки органов и тканей, из которых после фиксации готовят срезы на замораживающем микротоме или после заливки целлоидином (парафином).
Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и просматривают сначала при малом увеличении (окуляр х 7, объектив х 10), затем при обнаружении узелков рассматривают их при большом увеличении (объектив х 40 - х 60).
Типичной формой сапного изменения является инфекционная грнулема (узелок) специфического строения. В центре развивающегося узелка обнаруживают нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты и эпителиоидные клетки. Дифференцирующим признаком является карипрексис (распад ядер) лейкоцитов.
В стадии инкапсуляции центр узелка представлен глыбчато-зернистым распадом хроматина ядер лейкоцитов и окрашен в темно-синий цвет. Внутренний слой клеточной зоны состоит из эпителиоидных клеток с фибробластами и коллагеновыми волокнами.
Центральная часть обызвествленных узелков окрашена в темно-синий, а некротическая масса - в розовый цвет, Известь выступает в виде глыбок и зерен на общем розовом фоне необызвествленной некротической массы. За соединительтканный капсулой располагаются лимфоидные клетки в виде синеватого ободка.
Помимо узелков, сапные изменения могут проявляться в виде диффузного вопаления с экссудативным и продуктивным акцентом, которое характеризуется наличием очагов лейкоцитарных скоплений с явлениями кариорексиса, или пролиферацией лимфоидных и эпителиоидных клеток.
Изменения слизистой носовой полости могут представлять собой комбинацию узелков, первичных и вторичных язв и рубцов.
Постановка диагноза.
При положительном результате хотя бы одного из следующих методов исследования: клинического осмотра, глазной маллеиновой пробы, исследования сыворотки крови в РА или РСК животных считают подозреваемыми в заболевании сапа.
Диагноз на сап считают установленным в следующих случаях:
Положительная маллеиновая проба, подтвержденная результатом патологоанатомического исследования.
Обнаружение характерных для сапа изменений во внутренних органах и тканях.
Выделение культуры из патологического материала со свойствами, характерными для возбудителя сапа.
Получение положительных результатов биологического исследования, даже если культуры возбудителя из исходного материала не выделены.
Дифференциельный диагноз.
Носовую форму сапа необходимо отличить от мыта, а кожную - от эпизоотического лимфангита. При мыте развивается гнойное воспаление слизистой оболочки носовой полости без образования язв и происходит абсцедирование подчелюстных лимфоузлов. При микроскопии гноя обнаруживаются мытные стрептококки. При эпизоотическом лимфангите в гное язв обнаруживают криптококков. При всех неясных случаях проводят глазную маллеинизацию.
Лечение животных, больных сапом, запрещено, их уничтожают.
Иммунитет при сапе нестерильный. Попавшие в организм сапные бактерии фагоцитируются нейтрофилами и макрофагами, но фагацитоз при сапе незавершенный, а фагоцитированные бактерии не погибают. Роль гуморальных факторов также незначительная. Основную защитную роль играет способность организма купировать возбудителя в сапных узелках с последующим обызвествлением патологического фокуса. Средств для специфической профилактики сапа нет.
Профилактика и меры борьбы. Всех восприимчивых к сапу животных (лошадей, мулов, ослов, верблюдов) за 2 нед до передачи другим хозяйствам, отправки на выставки, спортивные состязания, перевозки по железной дороге или другим видом транспорта, а также до убоя на мясо подвергают клиническому исследованию на сап и маллеинизации. Вновь поступивших в хозяйство животных содержат в профилактическом карантине, в этот период проводят клинический осмотр и маллеинизацию. Все поголовье однокопытных животных во всех категориях хозяйств подвергают клиническому осмотру на сап и маллеинизации один раз в год.
В случае возникновения сапа хозяйство (ферму) объявляют неблагополучным и накладывают карантин. Запрещают передачу однокопытных животных другим хозяйствам, вывоз фуража, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, а также убой восприимчивых животных на мясо. Животных с характерными для сапа клиническими признаками, а также не имеющих клинических признаков болезни, но положительно реагирующих на маллеин, признают больными сапом, немедленно изолируют и уничтожают вместе с кожей.
Животных, подозреваемых в заражении, через каждые 15 дней исследуют на сап методом глазной маллеинизации до получения трехкратных отрицательных результатов по всей группе. Клинические осмотры проводят раз в 5 дней. Организуют для них индивидуальное кормление и водопой. Проводят механическую очистку и дезинфекцию неблагополучных помещений и территории вокруг них. Навоз, подстилку и остатки корма из помещений, откуда были выделены больные животные, сжигают. Навоз от животных, подозреваемых в заражении, подвергают биотермической обработке в течение 2 мес. Текущую дезинфекцию проводят через каждые 15 дней (после каждой маллеинизации), а в изоляторах, где содержатся больные животные, - каждый день.
Дезинфекцию проводят 3 %-ным р-ром формалина, 3 %-ным горячим (70 °С) раствором едкого натра, взвесью хлорной извести, содержащей 3 % активного хлора.