6.3.10. Собранных клещей можно сохранить живыми в прохладном месте в течение одного – полутора месяцев, а затем доставлять в лабораторию для дальнейшего исследования. Допустимо замораживание собранных и рассортированных по пулам клещей в жидком азоте. Перевозка клещей в лабораторию осуществляется в пробирках, помещенных в закрытые металлические пеналы или ящики, исключающие расползание эктопаразитов.
6.3.11. У животных (не менее 10 голов из числа осмотренных) берут кровь для исследования. Взятие крови из яремной вены в количестве 10 мл производится ветеринарным работником. Одну каплю крови наносят на фильтровальную бумажку диаметром 2 - 3 см, импрегнированную мертиолятом натрия в концентрации 1:1000. Всю кровь помещают в пробирку, в которой содержится 1 мл 6 % лимоннокислого натрия. Пробирки с кровью и мертиолятные бумажки этикетируются как в пункте 6.3.9.
6.3.12. Хранение и транспортировку пробирок с кровью осуществляют с применением термоконтейнеров. Допускается хранение пробирок с кровью при температуре окружающей среды не более 2 - 3 часов. Мертиолатные бумажки хранятся и транспортируются без термоконтейнеров.
6.4. Сбор и определение численности клещей в природных биотопах в весенне-летний период эпизоотологического обследования
6.4.1. Наиболее вероятно нападение клещей Н. marginatum и других иксодовых клещей на человека и на сельскохозяйственных животных на пастбищах, краях лесополос, путях скотопрогона и прилегающих к этим стациям нераспаханных участках. На этих территориях в первую очередь проводят определение численности иксодовых клещей.
6.4.2. Сбор иксодовых клещей в природных биотопах.
Голодных иксодовых клещей на всех фазах развития можно обнаружить на траве, ветках кустарника, поверхности почвы, где они сосредотачиваются в ожидании прокормителя. Сборы надлежит проводить утром (после росы) и при слабом ветре. Пастбища обследуют ранней весной до начала выпаса, до того, как их вытопчет скот. В зависимости от характера обследуемой территории и экологических особенностей клещей применяют различные способы их сбора.
На степных участках эктопаразитов собирают на «волокушу», т.е. на кусок (1,5 - 2 м длины) однотонной светлой ворсистой ткани (фланель). В швы противоположных узких сторон куска вставляют по рейке. К верхней рейке прикрепляется шнур, за который берёт сборщик и медленно протягивает «волокушу» (справа от себя) по участку. Клещи цепляются за ткань, с которой их снимают мягким пинцетом и помещают в пробирку.
На луговых участках с высокой травой и кустарниками клещей собирают на флаг из такой же ткани. Кусок ткани длиной 1 м и шириной 60 см прикрепляют узкой стороной к рейке. Развернутый флаг сборщик протаскивает перед собой по дуге слева направо, затем на следующий шаг - в обратном направлении. Осмотр и сбор клещей с обеих сторон флага следует проводить через каждые два взмаха.
Для сбора клещей в лесных стациях применяют «пропашник» с «волокушей». Он представляет собой лист фанеры или контур (каркас) толстой проволоки размерами 40 х 60 см, обтянутый вафельной тканью. К нижней стороне «пропашника» (ширина 40 см) пришивается кусок вафельной ткани длиной 50 см, который играет роль «волокуши», собирая клещей с подстилки и в прилегающем травянистом ярусе. Держа «пропашник» за ручку и протаскивая его сбоку от себя, собирают активных клещей, находящихся на растениях и поверхности почвы в учетной полосе. Как правило, сбор ведут два человека - один идет с «пропашником», считает шаги и диктует описание биотопов, другой ведет запись, сбор и хранение клещей во время маршрута. Остановки и осмотр делают через каждые 20 м.
В связи с тем, что иксодовые клещи могут нападать на человека, на остановках сборщики внимательно осматривают друг друга, снимая всех прицепившихся на одежду клещей. Кроме того, существует метод учета численности на «учетчика». Для этого «флаг» или «пропашник» надо вести только сбоку от себя, чтобы у учетчика был свой маршрут, а клещей следует собирать в разные пробирки.
В целях защиты от клещей сборщик должен быть одет в комбинезон или брюки и рубашку из светлой однотонной плотной (но не гладкой) ткани. Верхнюю часть одежды убирают в брюки и плотно подпоясывают. Носки или чулки натягивают поверх брюк и прибинтовывают марлей так же, как и манжеты рубашки. На голову надевают капюшон или косынку, капюшон заправляют под ворот рубашки, а косынку завязывают поверх воротника. На ногах должны быть сапоги. Допускается использовать специальную одежду для защиты от нападения клещей или комбинезоны типа «Tyvek classic CHF5 white» или «Tychem C» в комбинации с сапогами.
6.4.3. Клещей H. marginatum в открытых стациях собирают методом «на наблюдателя». Выполняется этот метод следующим образом: на участке почвы с низкой растительностью расстилается белое полотнище (фланелевое) размерами 3 х 4 м. В центр этого полотнища садится «наблюдатель». Периодически он встает и топает ногами. Набегающих клещей собирают с полотнища в пробирку. Единицей учета клещей при этом является время - 1 час работы одного «наблюдателя».
6.4.4. Места активного нападения клещей обычно хорошо известны местным жителям, результаты опросов которых следует учитывать при эпизоотологическом обследовании.
6.4.5. Собранный полевой материал доставляют в лабораторию с оформлением направления (приложение 5). Необходимо следить за температурным режимом во время доставки материала. Резкие колебания температуры (например, от 4 ºС до 20 ºС) губительны для клещей.
6.4.6. Определение показателей численности клещей (индекс обилия, индекс встречаемости, индекс доминирования и др.) осуществляют также в соответствии с действующими методическими документами по паразитологической работе в природных очагах различных инфекций.
6.4.7. В весенне-летний период проводят учет численности грачей как основных прокормителей преимагинальных фаз клеща Н. marginatum. В это время грачи концентрируются на гнездовьях (грачевниках) и относительно легко поддаются учету. Как правило, грачевники располагаются линейно в лесополосах и видны издали по наличию гнезд на деревьях и концентрации птиц, особенно в утренние и вечерние часы.
6.4.8. Для подсчета грачей в лесополосах определяют следующие параметры:
а - среднее количество жилых гнезд на одном дереве;
b - количество деревьев с гнездами на заселенном участке лесополосы (для этого подсчитывают количество деревьев с гнездами на небольшом отрезке – от 20 м до 30 м и пересчитывают на общую длину грачевника).
Численность взрослых грачей (Р) будет равна:
Р = 2аb
Расположение всех обнаруженных грачевников наносят на рабочую карту.
6.4.9. Проводят отлов мелких диких млекопитающих (грызунов), являющихся прокормителями преимагинальных фаз Н. marginatum, D. marginatus, Rh. rossicus и Ix. ricinus. Применяют метод выставления линий ловушек «Геро» с использованием стандартной приманки – кусочка белого хлеба, пропитанного подсолнечным маслом. Ловушки выставляют по прямой линии с интервалом от 2 м до 3 м в количестве 100 - 200 штук в вечернее время и снимают утром. Показателями численности и видовой структуры мелких млекопитающих являются процент попадания и индекс доминирования.
Процент попадания определяют по формуле:
% попадания = а /b х 100, где
а – число пойманных зверьков, b – число выставленных ловушек.
Индекс доминирования вычисляется по формуле:
индекс доминирования = с/а х 100, где
с – число пойманных зверьков того или иного вида, а – число всех пойманных зверьков.
6.5. Определение численности клещей в природных биотопах в летне-осенний период эпизоотологического обследования
6.5.1. Начало летне-осеннего периода эпизоотологического обследования определяется наступлением очередного фенологического периода развития клеща Н. marginatum. С середины июня до первой декады июля начинаются массовый выплод личинок клещей и последующая их линька в нимфы. Прокормителями преимагинальных фаз клещей Н. marginatum являются дикие животные - млекопитающие и птицы. Численность имаго на домашнем скоте при этом значительно уменьшается и в августе доходит до минимальных значений (единичные клещи на отдельных домашних животных).
6.5.2. Основное направление эпизоотологического обследования в этот период смещается в сторону обследования диких животных. По-прежнему, необходимы выборочный контроль заклещёвленности скота в неблагополучных хозяйствах и контроль эффективности проведенных летом акарицидных мероприятий.
6.5.3. Особенностью этого этапа обследования являются необходимость организации охоты (отстрела) на диких млекопитающих (заяц-русак) и птиц (грач, серая ворона, куропатка), а также отлов диких млекопитающих (еж ушастый). Необходимо в этот период организовать также обследование индеек. В составе зоологической группы следует иметь опытного охотника с документами, разрешающими охоту на перечисленных выше диких животных.
6.5.4. Добытых мелких млекопитающих и птиц сразу помещают в мешки из плотной ткани (бязи) с двойными простроченными швами; горловину мешка дважды заворачивают, складывают «гармошкой» и завязывают пришитой к мешку завязкой, чтобы исключить рассеивание членистоногих. Размеры мешков должны соответствовать габаритам животных. Так, для зайцев мешок должен иметь размеры 40х60 см, для грачей и других птиц - 30х40 см. К мешку привязывается этикетка. Доставка добытых животных в лабораторию для сбора с них клещей должна осуществляться не позднее одних суток с момента отстрела.
6.5.5. Ежей добывают ночью, объезжая по проселочным дорогам поля и зернохранилища.