Для постановки модельных микроэкосистем на дно двух высоких цилиндров V = 500 см3 помещалось 100 г. исследуемой почвы и заливалось 1000мл. воды в первом случае взятой из реки Кривая Болда, а во втором – из озера Баскунчак. В том виде экосистемы оставляли на открытом воздухе на 3 недели. По прошествии этого времени со дна цилиндра забирают небольшое количество почвы, просушивают ее на воздухе, затем взвешивают в количестве 1г, которую помещали в пробирку с 10 г. стерильной воды. Производили ряд последовательных разведений:10-1 -10-7. Из каждого разведения брали по 1 мл и помещали в высокие стерильные пробирки методом глубинного посева. В полученную культуральную жидкость заливают жидкую среду Виноградского до 3/4 объема.
Данные экосистемы исследовались также на среде Имшенецкого, при этом среда в высокой пробирке, предварительно простерилизованная засевается комочком почвы и помещается в термостат.
Необходимость изучения маслянокислых бактерий в водоемах была очевидной. Обследование разнотипных водоемов с широким спектром гидролого-гидрохимических и продукционных характеристик позволило впервые выявить экологические особенности распределения отдельных видов маслянокислых бактерий. Главными факторами, обуславливающими преимущественное развитие тех или иных бактерий в отложениях, являются концентрация, состав и доступность Сорг - соединений, отражающие трофический статус водоемов.Cpasteurianum, сбраживающий простые сахара, доминирует вилах евтрофных озер донных отложений полисапробных зон с максимальным содержанием легкогидролизуемых соединений. C. butyricum и C. felsineum, ферментирующие различные полисахариды, преобладают в мезотрофных озерах и водохранилищах
, грунты которых формируются под влиянием аллохтонного стока и прибрежной растительности. C. acetobutyricum, обладающий способностью усваивать не только углеводы и аминокислоты, но также лигнино – гумусовые соединения, достигает максимума донных отложениях ацидных хтониоевтрофных озер. Таким образом, полученные на обширном материале новые для водной микробиологии сведения неоспоримо свидетельствуют о геохимической значимости маслянокислых бактерий, которые являются важнейшим звеном бактериальных сообществ донных отложений внутренних водоемов разного типа (Дзюбан, 2005).
Глава 3. Результаты исследований
При постановке накопительной культуры, выделении и микроскопировании маслянокислых бактерий получили следующие данные.
Таблица 1
Культуральные признаки маслянокислых бактерий на среде Виноградского
| Степень разведения | Культуральные признаки | Морфологические признаки | |
| Обнаруженные микроорганизмы | 10-1 | Образовался серый осадок, имеется муть и пленка. | |
| Г+ удлиненные и утолщенные палочки, наблюдаются клостридиальные споры | Clostridium | 10-2 | |
| Образовался серый осадок, появилась муть. | Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium | |
| 10-3 | Образовался осадок, имеется муть | Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium |
| 10-4 | Имеется осадок, имеется муть и газ | Г+ цилиндрические палочки с клостридиальными спорами | |
| Clostridium | 10-5 | Образование осадка, мути и газа | |
| Г+ палочки с закругленными концами со спорой на конце | Clostridium | 10-6 | |
| Образование осадка, мути и газа | Г+ длинные и толстые палочки с клостридиальными спорами | Clostridium | |
| 10-7 | Имеется осадок, имеется муть | Г + удлиненные палочки с круглыми концами с плектридиальными спорами | Clostridium |
| 10-1 | Имеется осадок, образовалась муть | ||
| Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium | 10-2 | |
| Образовался газ, осадок серый, имеется муть | Г+ цилиндрические палочки с клостридиально расположенными спорами | Clostridium | |
| 10-3 | Образовался серый осадок, среда мутная, имеется газ | Г+ палочки с закругленными концами и со спорой на конце | Clostridium |
| 10-4 | Образовался серый осадок, образовался газ, имеется муть | Г+ удлиненные и утолщенные палочки, наблюдаются споры | |
| Clostridium | 10-5 | Образовался осадок, имеется запах газа, муть | |
| Г+ палочки с клостридиально расположенными спорами | Clostridium | 10-6 | |
| Образовался серый осадок, имеется муть, образовался газ | Г+ длинные и утолщенные палочки, наблюдаются споры | Clostridium | |
| 10-7 | Образовался серый осадок и газ, имеется муть | Clostridium |
При анализе данной таблицы можно наблюдать, что здесь весьма интенсивно происходили процессы брожения: происходило помутнение среды, образовывался газ, чувствовался сильный запах масляной кислоты, выделился осадок, присутствовала пленка. При культивировании в среде создались анаэробные бактерии, поэтому обнаруженные здесь бактерии относятся к анаэробам и образуют споры.
Таблица 2
Культуральные признаки бактерий на среде Имшенецкого
| № пробы | Культуральные признаки | Морфологические признаки | Обнаруженные микроорганизмы |
| 10-1 | Среда зеленого цвета, фильтровальная бумага ослизнилась | Г+ длинные тонкие палочки, наблюдаются круглые споры на конце | |
| Clostridium | 2 | Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | |
| Г+ палочки со спорой на конце | Clostridium | 3 | |
| Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | Г + тонкие прямые палочки, образуют споры (в виде барабанной палочки) | Bacillus | |
| 4 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г + тонкие палочки с круглой спорой на конце | Clostridium |
| 5 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие палочки со спорами на одном конце | |
| Bacillus | 6 | Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | |
| Г + палочки, имеющие споры в виде барабанной палочки | Clostridium | 7 | |
| Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие палочки, наблюдаются круглые споры на конце | Clostridium | |
| 1 | Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие прямые палочки, образующие споры в виде барабанной палочки | |
| Bacillus | 2 | Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | |
| Г+ палочки с закругленным концом и со спорой | Clostridium | 3 | |
| Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | Г+ палочки с закругленным концом и со спорой | Clostridium | |
| 4 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г- палочка с круглой спорой на конце | Сlostridium |
| 5 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г- палочки с грушевидной спорой на конце | |
| Clostridium | 6 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | |
| Г- палочка с округлой спорой на конце | Clostridium | 7 | |
| Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ палочки со спорами на одном конце | Bacillus |
При анализе данной пробы наблюдалось присутствие на среде анаэробных спорообразующих палочек. Заметен интенсивный процесс разрушения клетчатки. Бумага ослизняется в результате образования оксикислот.
Таблица 3.
Культуральные признаки бактерий на картофельной среде
| Кол – во повторностей | Культуральные признаки | Морфологические признаки | Обнаруженные микроорганизмы |
| 1 | Цвет среды – светло- зеленый, образовались пузырьки газа, среда мутная | Г - длинные палочки, образующие клостридиально расположенные споры | |
| Clostridium | 2 | Среда желтая, образовался газ, среда мутная | |
| Г + удлиненные палочки с закругленными концами, имеются плектридиально расположенные споры | Clostridium | 3 | |
| Среда мутно – желтого цвета, образовался газ | Г+ палочки с круглыми концами, споры плектридиальные | Clostridium | |
| 4 | Среда желтого цвета, имеется газ, среда мутная | Г+ палочка со спорой на конце | Clostridium |
| 5 | Среда мутная, желтого цвета, образовался газ | Г - палочки с округлыми концами | |
| Clostridium | 6 | Среда желтого цвета, мутная, образовался газ | |
| Г+ палочки, имеющие споры в виде барабанной палочки | Clostridium | 7 | |
| Среда желтого цвета, мутная, образовался газ | Г+ палочки с закругленными концами и плектридиально расположенными спорами | Clostridium |
При анализе данной пробы можно заметить, что здесь присутствуют анаэробные образующие клостридиальные споры палочки. Интенсивно происходят процессы маслянокислого брожения: помутнение и пожелтение среды, образование пузырьков газа, запах масляной кислоты, образование осадка.
Результаты выделения бактерий из почвы, используемой в микроэкосистеме
| Clostridium | 10-4 | ||
| Образовался газ, осадок серого цвета, муть | Г - длинные тонкие палочки cо спорами | Clostridium | |
| 10-5 | Образовался газ, осадок серого цвета, среда мутная | Г - короткие изогнутые палочки в цепочках | Clostridium |
| 10-6 | Осадок серого цвета, муть | Г +крупные палочки со спорами на конце | |
| Clostridium | 10-7 | Осадок серого цвета, муть | |
| Г+ короткие, похожие на кокки палочки со спорами | Clostridium |
Таблица 4
Система с водой из реки Кривая Болда
Культуральные признаки бактерий на среде Виноградского