При микроскопическом исследовании выделений в случае острой гонореи в препарате обнаруживаются расположенные преимущественно внутри нейтрофильных гранулоцитов, сгруппированные в шахматном порядке гонококки в случае хронической - приемущественно внеклеточно расположенные.
При хронической гонорее могут появляться дегенеративные формы гонококков. В первой стадии дегенерации наблюдаются слабоокрашенные микро - и макроформы гонококков; во второй - они теряют свою типичную почковидную форму и становятся полукруглыми; в третьей - они округляются в виде шарообразных диплококков; в четвёртой стадии - сжимаются в виде отдельных точек.
Для типичной гонореи в стадии обострения характерно наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов; гонококки расположены как внутри их, так и внеклеточно. Другой бактериальной флоры нет.
При латентно протекающей хронической гонорее много нейтрофильных гранулоцитов. Гонококки и другие микроорганизмы отсутствуют.
Наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов с полуразрушенными, дегенеративно изменёнными ядрами и цитоплазмой, палочек Дедерлейна и обилие банальной микрофлоры для гонореи нехарактерно, а после её лечения может служить признаком выздоровления.
Согласно приказу МЗ СССР № 936 от 12 июля 1985 г." Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза ", используются следующие методы выявления гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим.
Реактивы.1.1% водный раствор метиленового синего;
2.96° этиловый спирт.
Оборудование: микроскоп с осветителем, песочные часы, штативы.
Приготовление препаратов. Материал наносят на чистые обезжиренные предметные стёкла тонким равномерным слоем, высушивают на воздухе.
Окраска. Препарат фиксируют 3 минуты в 96° этиловом спирте, высушивают и наносят на 1 мин 1% раствор метиленового синего, после чего тщательно смывают оставшийся краситель водой и высушивают в штативе.
Микроскопия. Исследование проводят с естественным или искусственным освещением (объектив 90 х иммерсионный, окуляр 7 х или 10 х; иммерсионное масло - кедровое).
Ядра клеток окрашены в синий цвет, протоплазма - в голубой различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиоцитах.
Влагалищные трихомонады отличаются полиморфизмом (округлые, овальные, полигональные), расположены в слизи, между клеточными элементами; у них четко видна оболочка; ядро расположено эксцентрично и интенсивно окрашено в синий цвет, цитоплазма нежная, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветны.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим.
Реактивы.1.1% раствор эозина в этиловом спирте.
2.1% водный раствор метиленового синего.
Окраска. Без предварительной фиксации препараты погружают на 10 - 15 с в 1% раствор эозина, смывают струёй водопроводной воды и заливают 1% раствором метиленового синего на 1 - 2 мин, затем тщательно смывают оставшийся краситель водой, и высушивают в штативе.
Окраска этим методом предусматривает выявление, наряду с гонококками и влагалищными трихомонадами и эозинофильных гранулоцитов.
Микроскопия. Препарат синего цвета: ядра клеток окрашены в синий, цитоплазма - в голубой цвет различной интенсивности. При наличии эозинофильных гранулоцитов в цитоплазме имеется зернистость красного или ярко - розового цвета. Слизь голубого цвета. Бактериальная флора окрашена в синий цвет различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и в эпителиальных клетках.
Влагалищные трихомонады: ядра овальные, синего цвета, расположены эксцентрично, цитоплазма чётко очерчена, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветные.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зелёным.
Реактивы.1.0,5% водный раствор бриллиантового зелёного.
2.96° этиловый спирт.
Окраска. Препарат фиксируют 3 мин в 96° этиловом спирте, высушивают, наносят 0,5% раствор бриллиантового зелёного на 1 мин. Затем тщательно смывают краситель под струёй холодной воды и высушивают в штативе.
Микроскопия. Препарат зелёного цвета: ядра клеток окрашены в зелёный цвет, цитоплазма - в светло - зелёный. Слизь зелёного цвета. Бактериальная флора окрашена в зелёный цвет различной интенсивности. Гонококки тёмно - зелёного цвета, чётко очерчены, бобовидной формы, парные, располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках. Влагалищные трихомонады с чёткой оболочкой, полиморфные (округлые, овальные, полигональные), расположены между клеточными элементами или в слизи. Ядро интенсивно окрашено в зелёный цвет, расположено эксцентрично. Цитоплазма сетчатая, светло - зелёного цвета; вакуоли бесцветные.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грамма.
Метод основан на свойстве гонококков, влагалищных трихомонад и других грамоотрицательных микроорганизмов отдавать основной фиолетовый краситель при обесцвечивании на протяжении определённого времени в этиловом спирте и на свойстве докрашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево - красным красителем.
Реактивы.1.1% водный раствор кристаллвиолета.
2. Водный раствор Люголя.
3.96 ° этиловый спирт.
4.1% водный раствор нейтрального красного.
Окраска. Препарат покрывают фильтровальной бумагой и заливают её
1% водным раствором кристаллвиолета на 1 мин.
Для того чтобы между фильтровальной бумагой и предметным стеклом не было пузырьков воздуха, полоску фильтровальной бумаги, смоченной кристаллвиолетом, придавливают стеклянной пипеткой или палочкой к стеклу.
Через 1 минуту фильтровальную бумагу удаляют, препарат промывают струёй водопроводной воды и заливают на несколько секунд раствором Люголя до почернения мазка.
Затем остаток раствора Люголя смывают и обесцвечивают препарат в 96 ° этиловом спирте, поочерёдно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике.
Обесцвечивают препарат до тех пор, пока с его тонких участков не будут стекать фиолетовые струйки красителя и они приобретут бледно - серый цвет.
После этого препарат быстро промывают под струёй водопроводной воды и докрашивают в течение 3 мин 1% водным раствором нейтрального красного, снова тщательно промывают (пока струя воды, стекающая с него, станет прозрачной) и высушивают.
Микроскопия. При правильной окраске препарат должен иметь оранжево - красный цвет на тонких участках и лилово - фиолетовый - на толстых. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток), частично удерживающих основную фиолетовую окраску, должны быть окрашены в центре в фиолетовый цвет, по переферии - в оранжево - красный, а гонококки, расположенные в лейкоцитах и на эпителиальных клетках, должны иметь оранжево - красный цвет.
Необходимое качество окраски обесцвечивается своевременным прекращения обесцвечивания препарата.
При недообесцвечивании, когда ядра клеток интенсивно окрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фиолетовую окраску; при переобесцвечивании, стафилококки и стрептококки могут быть окрашены в оранжево - красный цвет и приняты за гонококки.
Идентификация гонококка производится на основании его морфологических свойств, локализации и отношения к окраске по Грамму Гонококки - это парные кокки, имеющие форму кофейных зёрен, обращены друг к другу вогнутой стороной.
Размножаясь делением в различных плоскостях цепочек не образуют. Внутри лейкоцитов гонококки располагаются парами или группами таким образом, что одни из них лежат по отношению к другим под различным углом.
Внеклеточно расположенные гонококки также имеют характерные особенности. Чаще всего они в большом количестве лежат в клетках плоского эпителия рядами с расположением внутри ряда перпендикулярно друг другу. Частота внутри - и внеклеточной локализации гонококков зависит как от природы заболевания, так и от методики взятия материала. При идентификации гонококка необходимо учитывать все три его основных признака. Положительное заключение даётся при обнаружении типичных форм гонококка.
Влагалищная трихомонада окрашивается бледно: оболочка в виде тонкой полоски окружает сетчатую цитоплазму оранжево - красного цвета, ядро сиреневого или фиолетового цвета, жгутики и ундулирующая мембрана не просматривается.
Обнаружение влагалищных трихомонад в исследуемом материале при изучении нативного препарата.
Метод основан на обнаружении возбудителя в препарате по его движению среди клеточных элементов и микроорганизмов.
Реактив.1. Изотонический раствор хлорида натрия.
Приготовление препаратов. На предметное стекло наносят каплю тёплого изотонического раствора натрия хлорида и смешивают с исследуемым отделяемым с очага заболевания. Взвесь накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Микроскопия. Влагалищную трихомонаду определяют по грушевидной, округлой или овальной форме, небольшой величине (немного больше лейкоцита), характерными толчкообразными движениями ундулирующей мембрангы и жгутиков, которые особенно хорошо видны под микроскопии с тёмнопольным или фазовоконтрастным конденсором.
Вагинит (кольпит) - воспаление слизистой оболочки влагалища. Вызывается стрепто- и стафилококками, трихомонадами и грибками. Может возникнуть при несоблюдении правил личной гигиены при гипофункции яичников, сахарном диабете и др.