Пищевое отравление, вызываемое Bacilluscereus, имеет как общеклинические проявления: тошноту и абдоминальные боли, так и превалирующие симптомы, на основании которых в настоящее время выделяют две формы заболеваний: диарейную и токсикозоподобную (рвотную).
Диарейная форма практически идентична проявлениям пищевого отравления, вызванного Clostridiumperfringens. Клиническая картина развивается через 24 ч после употребления "виновного" продукта. Диарея (частая, водянистая, с большим количеством слизи) наблюдается в течение 6.15 ч без присоединения рвоты. Температура тела, как правило, не повышается. Диарейная форма развивается при поступлении в организм больших количеств Bacilluscereus - более 106 микробных клеток, которые продуцируют энтеротоксин диарейного типа.
Токсикозоподобная {рвотная) форма пищевого отравления имеет чрезвычайно короткий инкубационный период - 0,5.6 ч и характеризуется тошнотой и рвотой, длящейся до 24 ч. Симптоматика данного типа отравления очень похожа на бактериальный токсикоз, вызванный Staphylococcusaureus. В "виновном" продукте и рвотных массах регистрируется специфический термостабильный токсин.
Возникновение конкретной формы пищевого отравления зависит от внешних условий размножения бактерий, определяющих возможность проявления токсигенного потенциала Bacilluscereus. Диагностика пищевого отравления, вызванного Bacilluscereus, основана на изоляции и идентификации аналогичных штаммов и оценке общего количества бактерий в материалах от больного и в подозреваемом пищевом продукте.
Диарейный тип пищевого отравления чаще возникает при употреблении некачественных мяса, молока, овощей и рыбы. Токсикозоподобная (рвотная) форма заболевания связана, как правило, с контаминацией крупяных, картофельных и макаронных блюд, салатов, пудингов, соусов. Во всех случаях интенсивному накоплению бактерий и стимулированию токсинообразования способствует нарушение температурных условий и сроков хранения готовых к употреблению блюд и скоропортящихся продуктов. Особенно интенсивное размножение Bacilluscereusпроисходит при температуре выше 15 °С.
Бактериологическое исследование мяса и мясопродуктов проводят с целью выявления в мясе патогенных микроорганизмов и, в первую очередь, возбудителей остроинфекционных заболеваний,
возбудителей токсикоинфекций и токсикозов.
Для бактериологического исследования отбирают следующие пробы: часть мышцы сгибателя или разгибателя передней и задней конечностей туши размером 8x6x6, покрытые фасцией; лимфатические узлы - поверхностный и наружный подвздошный вместе с окружающей их соединительной и жировой тканями (а от свиней - поверхностно-шейный дорзальный и подколенный); долю легкого, селезенку, почку, долю печени с печеночными лимфоузлами (или при отсутствии лимфоузла - желчный пузырь, без желчи) и при подозрении на сибирскую язву - трубчатую кость. В особых случаях, когда требуется исследование на сибирскую язву, помимо указанных проб, в лабораторию направляют патологически измененные opганы, а также лимфоузлы, собирающие лимфу с измененных тканей, ухо с той стороны, на которой лежало животное
Пробы отбирают стерильными инструментами, завертывают в пергаментную бумагу (пробы от каждой туши в отдельности). На бумаге пишут номер туши и вид животного, помещают в металлический, плотно закрывающийся ящик и с сопроводительным документом передают в лабораторию. В сопроводительном документе указывают вид животного, название материала, причину направления на исследование, краткие патологоанатомические данные, выявленные при ветеринарно-санитарной экспертизе туши, предполагаемый диагноз, дату направления материала на исследование и подпись лица, направляющего материал. Бактериологическое исследование начинают с бактериоскопии мазков-отпечатков.
Посевы делают с соблюдением правил асептики. Из середины исследуемых проб после прижигания поверхности горячим шпателем вырезают стерильными ножницами кусочек материала, захватывают его стерильным пинцетом и прикладывают к поверхности предметного стекла. Из каждой пробы приготавливают от 2 до 10 мазков-отпечатков. При исследовании уха отпрепарированную кожу, прокалывают пастеровской пипеткой краевую вену и из капли крови приготавливают мазок. Трубчатую кость распиливают (места распила прижигают), пастеровской пипеткой извлекают костный мозг и тонким слоем покрывают предметное стекло После высушивания препаратов на воздухе с них полоской фильтровальной бумаги удаляют жир или обрабатывают поверхность мазков спиртом, эфиром, ацетоном или ксилолом. Мазки фиксируют, окрашивают по Грамму и одним из специальных методов для выявления капсул сибиреязвенного микроба (по Ольту, Михину, Муромцеву и др.).
При наличии в мазках крупных грамположительных палочек с обрубленными или вогнутыми внутрь концами, окруженных капсулой, дают предварительный ответ об обнаружении возбудителя сибирской язвы.
Необходимо отметить, что при микроскопическом исследовании мазков-отпечатков из поврежденных лимфатических узлов свиней не всегда обнаруживают типичные бациллы сибирской язвы. Часто в мазках встречаются длинные, сильно изогнутые или перекрученные нити бацилл, иногда разбухшие и потерявшие правильные контуры. Наряду с длинными встречаются нити, распавшиеся на фрагменты различной величины. Возбудитель утрачивает способность окрашиваться по Грамму, слабо окрашивается метиленовой синью.
При отсутствии в исследуемом материале микроорганизмов, сходных с сибиреязвенными, производят высевы на следующие питательные среды: мясопептонный агар - для исключения возбудителей зооантропонозиых и других инфекций; на одну дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева) - для обнаружения кишечно-сальмонеллезной группы бактерий. Одновременно с посевом на дифференциальную среду исследуемый материал вносят в среду обогащения (Кауфмана или селенитовый бульон) - для выявлении сальмонелл; измельченные кусочки мышц и лимфатических узлов вносят в колбу или широкую пробирку, кусочки паренхиматозных органов - в другую. В среду Киллнана высевают для выделения Salmonellacholeraesuis; в среду ХБ или Хефуца, Кода - для обнаружения бактерий группы кишечных палочек; палочки протея посев делают по методу Щукевича - в конденсат скощенного агара; в среду Китт-Тароцци - при подозрении на анаэробные инфекции.
Посевы культивируют при температуре 37°С 16-24 ч, после чего просматривают при помощи лупы или под малым увеличением микроскопа.
На чашках с МПА отыскивают колонии, характерные для возбудителей сибирской язвы, рожи свиней, пастереллеза, листериоза, кокковых инфекций; на дифференциальных средах - колонии, характерные для бактерий кишечно-сальмонеллезной группы.
В зависимости от результатов бактериоскопии и характера роста на питательных средах проводят исследование на наличие возбудителя определенной инфекции.
Исследование на выявление возбудителей зооантропонозных болезней, пищевых отравлений и возбудителей порчи продуктов
Если на чашках с МПА выросли колонии, сходные с сибиреязвенными, то из этих колоний готовят мазки, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении в мазках грамположительных палочек с обрубленными концами, расположенных цепочками - и имеющих вид бамбуковой трости, исследование проводят только на сибирскую язву.
Часть подозрительных колоний снимают с агара бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой и растирают в конденсационной воде скошенного агара или в пробирке с бульоном и отсюда производят высевы на цветной ряд и заражение белых мышей. После гибели мышей из их органов приготовляют мазки-отпечатки и делают высевы на МПА и МГЦ для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы.
При бактериологическом исследовании на антракс, особенно несвежего материала. Часто обнаруживают большое количество посторонней микрофлоры, В этом случае затруднение вызывает дифференциация сибиреязвенных бацилл от Вас.сеreusи других сапрофитных аэробов, положительно красящихся по Граму, образующих споры, колонии которых имеют некоторое сходство с колониями сибиреязвенного микроорганизма.
В целях дифференциации возбудителя сибирской язвы от спорообразующих сапрофитов необходимо учитывать следующее: рост на кровяном агаре, МПЖ, подвижность, образование капсулы, авирулентны для лабораторных животных и др.
Сибиреязвенный микроб на М1ГБ дает характерный рост: бульон прозрачный, на дне пробирки - осадок хлопьевидный или в виде комочка ватты.
Для ускоренной дифференциальной диагностики возбудителя сибирской язвы от сходных почвенных бацилл предложен ряд методов:
1)феномен ожерелья;
2)реакция преципитации в геле (агаре);
3)метод люминисцирующих антител;
4)фаговый тест.
Кроме бактериологического исследования, диагноз на сибирскую язву устанавливают серологическим методом (постановкой реакции преципитации).
Посевом на МПА исключают также возбудителей рожи свиней, пастереллеза, возбудителя токсикоза - энтеротоксигенного стафилококка и др.
Микроорганизмы Bac. cereusшироко распространены в окружающей среде: постоянно обитают в почве, их можно выявить в воздухе, воде, на одежде и руках людей, кожном покрове животных, поверхности оборудования предприятия по изготовлению продуктов питания. В кишечнике здоровых людей и животных эти микроорганизмы выявляют редко (менее 1% исследованных случаев) и в небольших количествах. В пищевые продукты проникают обычно экзогенно.