Прозрачная сыворотка до дальнейшей обработки сохраняется при температуре от 0 до 4° не более 7 дней. Чтобы удлинить срок хранения, сыворотку подвергают стерилизующей фильтрации. В качестве консерванта применяется хлороформ (0,5%).
При использовании плацент производится экстрагирование содержащихся в них антител с помощью 2% раствора хлористого натра, добавляемого в количестве 1,5-2 литра на килограмм измельченных плацент. Экстрагирование продолжается в течение суток при 0°, смесь систематически перемешивается. После отделения тканевой массы путем фильтрации через полотно и центрифугирования для удаления эритроцитов и мелкодисперсного осадка получается готовый плацентарный экстракт, представляющий собой прозрачную, красноватого цвета жидкость, содержащую 1—2% белка. До дальнейшей обработки он сохраняется при 0°.
Заготовленное сырье (сыворотка из венозной, плацентарной крови, плацентарный экстракт) подвергается фракционированию спирто-водными растворителями для выделения гамма-глобулина. Плацентарная сыворотка и экстракты обрабатываются для этой цели несколько иначе, чем сыворотка, полученная из венозной крови. Принципиальное отличие сводится к введению дополнительной очистки их перед фракционированием и после первого осаждения. Эта процедура имеет целью удалить примеси, нерастворимые при низких (8%, 5%) концентрациях спирта.
Готовый гамма-глобулин представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость, бесцветную или желтоватую.
Гамма-глобулиновая фракция составляет 97% общего белка препарата. Каждая ампула содержит одну дозу гамма-глобулина, т. е. 3 мл 10%-ного белкового раствора. Помимо общего и специального контроля каждая серия гамма-глобулина проходит контроль на трех здоровых детях для выяснения реактогенности. Препарат признается ареактогенным, если введение его не приводит к развитию местных воспалительных явлений и подъему температуры выше 37,5°.
Серии гамма-глобулина с повышенной реактогенностыо выпуску не подлежат. Гамма-глобулин годен к употреблению в течение трех лет со времени получения сыворотки, из которой он приготовлен. Препарат хранится при температуре 2—10° в темном месте. Обычной дозой при своевременном применении является 1,5 мл гамма-глобулина. Наиболее эффективным является введение препарата в первые 4 дня инкубации, после седьмого дня инкубации эффективность препарата резко падает.
Если при контакте с коревым больным были ослабленные и больные дети, а также при позднем введении препарата доза его увеличивается до 4 5 мл. Гамма-глобулин вводится внутримышечно в верхний наружный квадрант ягодины при строжайшем соблюдении асептики. Учитывая вязкость, связанную с высоким содержанием белка, во избежание образования пены, препарат нужно набирать в шприц медленно, хорошо пригнанной иглой с широким просветом.
Введение гамма-глобулина создает пассивный иммунитет, оказывающий свое действие в течение 30 дней. При повторном контакте с больными корью после этого срока детям вновь вводится гамма-глобулин в объеме не менее 2-х мл. Противопоказаний к применению гамма-глобулина нет. При своевременном введении этот препарат является надежным средством профилактики кори. Он с успехом применяется также для профилактики полиомиелита, инфекционного гепатита, краснухи, паратита и др.
2. Коревые вакнины
Специфическая профилактика кори до настоящего времени осуществлялась путем создания пассивного искусственного иммунитета. В последние годы разработаны методы приготовления живых коревых вакцин, позволяющих создать активный искусственный иммунитет. В нашей стране изучаются в широком эпидемиологическом опыте коревые вакцины трех типов. Действующим началом всех вакцин являются живые, аттенуированные штаммы коревого вируса. Отличаются они одна от другой особенностями штаммов, способами их аттенуации и степенью реактогенности.
3. Живая коревая вакцина для введении без гамма-глобулина
Препарат представляет собой высушенную вирус-содержащую жидкость, снятую с первичной культуры почек морских свинок (П. М. С.).
Основное действующее начало его живой аттенуированный вирус (штамм Л-16, Ленинград), предложенный А. А. Смородинцевым, ослабленный в результате многократных (16 – 25) пассажей в тканевой культуре П. М. С.
Вакцина контролируется на бактериальную стерильность, биологическую активность, отсутствие случайных возбудителей, которые могут попасть из культуры ткани (цитопатогеиные и гемадсорбирующие вирусы, вирус лимфоцитариого хориомениигита и другие вирусы, микобактерии).
Биологическую активность вакнины проверяют на амниотических перевиваемых клетках человека.
Для проверки специфичности используется реакция нейтрализации цитопатических изменений в культуре амниотической ткани человека эталонной противокоревой сывороткой, полученной от лошадей или других животных (только не от морских свинок).
Безвредность и токсичность контролируются на морских свинках путем введения двух миллилитров вакнины, в течение пяти дней животные должны быть здоровы.
Для установления степени реактогенности препарат в дозе 0,5 (30—300 тканевых 50%-ных цитопатогенных доз ТЦД50 вводится 25 детям в возрасте от одного года до восьми лет. Он признается ареактогеиным в том случае, если в течение 72 часов после введения реакция у привитых отсутствует. Позже (через 6 -18 дней; могут возникать реакции, при которых появляются симптомы митигированной кори, не передающейся здоровым детям, находящимся в контакте с привитым. Иммуногенность вакцины оценивают на основании серологического обследования (по РСК, РН, ТРГА) парных сывороток двадцати детей, привитых вакциной.
Она считается иммуногенной, если стимулирует выработку антител не менее чем у шестнадцати детей. Вакцина выпускается в сухом виде. Предназначена для создания искусственного активного иммунитета против кори у детей, не болевших ранее. Прививке подлежат дети в возрасте от одного года до восьми лет. Поздние реакции, описанные выше, могут развиваться у 40— 60% привитых.
Вакцина вводится подкожно, однократно, в дозе 0,5 мл, содержащей аттенуированный вирус кори в количестве 30—300 ТЦД50. Ослабленным детям одновременно с вакциной вводят 0,5 мл гамма-глобулина.
4. Живая коревая вакцина института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР (ЖКВ АМН СССР)
Препарат представляет собой высушенную вируссодержащую жидкость, снятую с первичной культуры почек зеленых мартышек. Основное действующее начало его — живой аттенуированный вирус кори, адаптированный к клеточным культурам почек африканских зеленых мартышек.
Указанный вирус является вариантом штамма коревого вируса, выделенного от больного и аттенуированного Эндерсом. Дополнительно от больного он был аттенуирован Шварцем. В СССР степень его аттенуации была повышена путем адаптирования к культурам почек обезьян при температуре 32°.
Он получил название: «штамм коревого вируса ЭШЧ» — по первым буквам работавших с ним авторов (Эндерс, Шварц, Чумаков). Штамм характеризуется высокой иммуногенностью и низкой реактогенностью при введении, без гамма-глобулина, детям, не болевшим корью.
Всесторонне проверенный штамм, сохраняемый при — 70°, предназначен для многократного использования на производстве. Живая коревая вакцина контролируется на стерильность, безвредность, отсутствие токсичности для лабораторных животных. Она не должна содержать посторонних вирусных агентов. Заражение вакциной чувствительных к коревому вирусу обезьян не приводит к появлению нейросимптомов. На культурах клеток, при 32°, вакцина вызывает характерную дегенерацию, специфичность которой может быть проверена реакцией нейтрализации специфической сывороткой. Активность вакцины определяется количеством содержащихся в ней культуральных единиц вакцинного коревого вируса. Вакцина признается иммуногенной в том случае, если она стимулирует развитие антител не менее чем у 90% привитых детей. Введение вакцины детям не должно приводить к появлению симптомов кори, передающихся путем контакта непривитым. Препарат нетоксичен; в течение 72 часов после его введения не возникает никаких реакций; позже, через 6—18 дней, у 40% привитых могут наступить реакции, проявляющиеся в кратковременном повышении температуры (не выше 38,5°) и, в ряде случаев, в появлении отдельных симптомов митигированной кори. Вакцина вводится подкожно, однократно, в дозе 0,2—0,5 мл, содержащей не менее 1000 и не более 300000 культуральных единиц аттенуированного вируса кори. Ревакцинация проводится через 2—3 года по эпидемиологическим показаниям. Вакцина выпускается в сухом виде. Срок годности ЖКВ—1 год.
5. Живая коревая вакцина на человеческих диплоидных клетках из штамма Л-16.
Препарат представляет собой вируссодержащую жидкость, полученную при выращивании аттенуированного вируса кори (штамм Л-16) в культуре диплоидных клеток эмбриона человека. Для этих целей используется стандартный штамм перевиваемых диплоидных клеток человека, полученный из международного центра. Сохраняется он в замороженном состоянии (в жидком азоте). Перед введением в производство диплоидные клетки из каждой ампулы проходят тщательный бактериологический, микологический, вирусологический и гистологический контроль. Готовая вакцина проверяется по тем же показателям, что и первые две. Она должна быть стерильной, безвредной, биологически активной, не вызывать у привитых детей реакций в ранние сроки (72 час) и приводить к развитию вакцинальных реакций через 6—18 дней после прививки. Вакцинальные реакции проявляются в повышении температуры и симптомах митигированной кори. Число сильных реакций не должно быть выше 12%. Вакцина признается иммуногенной, если она вызывает образование антител не менее чем у 80% привитых. Вакцина вводится подкожно, однократно, в дозе 0;5 мл, содержащей от 50 до 300 ТЦД50, детям в возрасте от 1 года до 8 лет, не болевшим корью и не привитым ранее. Срок годности вакцины — 1 год.