Состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят при колибактериозе (стр. 27 из 33)

По классическому методу оптическую плотность измеряют при зеленом светофильтре. При использовании зеленого светофильтра, регистрируется окраска среды. Для исключения влияния этого фактора необходим дополнительный оптический контроль для каждой пробы в начале опыта. Чем больше гемолиз сыворотки, тем сильнее окраска среды и выше неспецифическое поглощение. Применение для этой цели красного светофильтра исключает влияние окраски среды. Пробы культивировали 6 ч при 37°С и рассчитывали бактерицидную активность в %.

Бактерицидную активность определяли как отношение роста микроорганизмов в опытной среде по сравнению с контрольной (без сыворотки) в процентах.

В результате проведенных исследований было установлено, что сыворотка крови новорожденных телят обладает выраженной бактерицидной активностью (табл. 3.16-3.19).

Бактерицидная активность сыворотки крови телят зависит от возраста, причем наименьший ее уровень отмечали у новорожденных телят до приема молозива.

На 2-й день жизни телят имело место достоверное повышение бактерицидной активности сыворотки у здоровых телят на 12,09 %, в 1-ой подопытной группе (больные) на 6,09 % и снижение во 2-й подопытной группе на 1,58 % в сравнении с периодом по выпойки молозива. На 5-й и 10-й дни отмечали повышение бактерицидной активности у здоровых телят в сравнении с периодом до поения молозива, соответственно на 14,09 % и 14,18 %, в 1-ой подопытной группе соответственно на 19,18 % и 9,91 %. Во 2-й подопытной группе отмечали снижение бактерицидной активности на 5-й день в сравнении с периодом до выпойки молозива на 1,86 %.

Данные исследования указывают, что наиболее критический возрастной период отмечен у телят 5- дневного возраста, так в 1-й опытной группе после 5- дневного возраста, установили достоверное снижение бактерицидной активности. Это различие составляет в сравнении с 10- дневным возрастом 9,27 %. Во второй подопытной группе гибель телят отмечали в 5-6 дневном возрасте.

При изучении величины связи между бактерицидной и фагоцитарной активностью установили высокую степень корреляции (r=0,88; Р=0,02) между фагоцитарной и бактерицидной активностью у здоровых телят до 20-и дневного возраста, в 30-и дневном возрасте коэффициент корреляции был равен 0,66.

В 1-й подопытной группе (больные телята) величина связи между фагоцитарной и бактерицидной активностью у телят до 5-дневного возраста равнялась 0,81, а в 30-дневном возрасте коэффициент корреляции несколько снижался до 0,74, тем не менее, связь считается высокой. Во второй подопытной группе (больные-павшие телята) коэффициент корреляции равен r=‑0,96, что указывает на наличие высокой отрицательной связи, с увеличением фагоцитарной активности (2-й день) уменьшается бактерицидная активность.

Таблица 3.16

Показатели гуморальной защитной реакции организма новорожденных телят (Р<0,05)

Возраст телят	Бактерицидная активность (%) сыворотки крови телят(x±m)
Здоровые, n=11	Больные, n=11	Павшие, n=7
До поения молозива	21,82 ± 0,55	21,91 ± 0,58	21,86 ± 0,55
2-й день	33,91 ± 0,44	28,00 ± 0,30	20,28 ± 0,52
5-й день	35,91 ± 0,44	41,09 ± 0,23	20,00 ± 0,82
10-й день	36,00 ± 0,25	31,82 ± 0,42	‑
20-й день	37,27 ± 0,27	34,18 ± 0,42	‑
30-й день	42,18 ± 0,42	36,73 ± 0,27	‑

3.5. Комплементарная активность сыворотки крови новорожденных телят

Механизм действия комплемента заключается в повреждении структуры клеточной стенки микробной клетки, которая не распадается целиком, в ней образуются полости, отверстия через которые вытекает цитоплазма. Повреждение оболочки нарушает осмотическое давление, что также вызывает гибель клетки. Феномен лизирующего действия комплемента хорошо выражен в отношении грамотрицательных бактерий, но грамположительные бактерии, как правило, не разрушаются комплементом.

В микробиологической и клинической иммунологии широко используется гемолитический метод титрования комплемента и сравнительно реже определение содержания комплемента до его бактерицидной или цитотоксической активности и количественное определение в весовых единицах.

В основе принципа гемолитического метода определения комплемента лежит гемолиз сенсибилизированных гемолизином эритроцитов в присутствии комплемента. Количество комплемента в испытуемой сыворотке выражают в условных единицах гемолиза. Титр комплемента определяют по 50 % гемолиза [С. J. Howard, A. A. Glynn, 1971; И. М. Архангельский, 1976; О. Н. Грызлова, П. А. Емельяненко, В. Н. Денисенко, 1978].

В результате проведенных исследований установлено, что (табл. 3.20-3.23) комплементарная активность у новорожденных телят (контрольная группа ‑ здоровые телята) возрастает достоверно (Р<0,05) до 30-дневного возраста по сравнению с периодом до поеная молозивом. Так, активность комплемента на 2-й день, после выпойки молозива увеличилась в 1,35 раза, на 5-й день в 1,38 раза, на 10-й день в 1,46 раза и на 30-й день в 1,67 раза, что соответствует до выпойки молозива 153,75±0,55, на 2-й день 208,08±0,42, на 5-й день 21З,00±0,68, на 10-й день 224,67±0,47 и на 30-й день 256,83±0,60 ед/мл.

В первой подопытной группе (больные телята) также имеет место тенденция увеличения активности комплемента в связи с возрастным периодом. Так, на 2-й, 5-й, 10-й день это увеличение составило 1,19, 1,13 и 1,14 раза, что соответствует до выпойки молозива 153,50±66, на 2-й день 183,50±0,50, на 5-й день 173,50±0,61 и на 10-й день 774,50 ± 0,51. Достоверное увеличение комплементарной активности сыворотки крови отмечали на 20-й и 30-й дни по сравнению с 5-м и 10-м дневным периодом 184,67±0,38 и 194,50±0,44 по сравнению с 173,50±0,81 и 174,50±0,51 (Р<0,05).

Во второй подопытной группе (павшие телята) отмечали не достоверное повышение комплементарной активности. Так, активность комплемента до выпойки молозива, была равна 153,71±1,03 на 2-й и 5-й день, этот показатель соответствовал 169,43±0,57 и 170,00±0,82 (увеличение равнялось в 1,10 и 1,11 раза).

Следовательно, увеличение комплементарной активности в 1,0 и 1,11 раза не было адекватным значению комплемента, обеспечивающему сохранность новорожденных телят.

Таблица 3.20

Комплементарная активность сывороток крови телят в зависимости от клинического статуса (x±m)

Возраст телят	Здоровые, n=12	Больные, n=12	Павшие, n=7
До поения молозивом	153,75 ± 0,55	153,50 ± 0,66	153,71 ± 1,03
2-й день	208,08 ± 0,42	183,50 ± 0,50	169,43 ± 0,57
5-й день	213,00 ± 0,68	173,50 ± 0,61	170,00 ± 0,82
10-й день	224,87 ± 0,47	174,50 ± 0,51	‑
20-й день	242,50 ± 0,47	184,64 ± 0,38	‑
30-й день	256.83 ± 0,60	194,50 ± 0,44	‑

3.6. Лизоцимная активность сыворотки крови

Лизоцим по своей природе является ферментом (ацетилмурамидаза) и содержится почти во всех органах и тканях животных. Содержание его в сыворотке крови новорожденных телят коррелирует с бактерицидной активностью. Лизоцим стимулирует фагоцитоз нейтрофилов и макрофагов, синтез антител, а также способен разрушать липополизахаридные поверхностные слои клеточных стенок большинства бактерий. Снижение титра лизоцима. или исчезновение его в крови приводит к возникновению инфекционной болезни [X. Я. Грант, Л. И. Яворский, И. А. Блумберг, 1973; И. М. Архангельский, 1976; Ю. А. Ширванян, А. А. Акопов, 1985; С. И. Плященко, 1991].

На основании проведенных опытов на телятах (табл. 3.24-3.27) от рождения до 30-дневного возраста установлено, что новорожденный организм обладает достаточно выраженной лизоцимной активностью. Так, после выпойки молозива лизоцимная активность у здоровых телят (контрольной группы) увеличилась на 2-й день в 2,77 раза, на 5-й день в 2,82 раза и на 10-й день в 2,9 раза. На 30-й день лизоцимная активность в процентном отношении равнялась уровню лизоцимной активности сыворотки крови новорожденных телят 2-дневного возраста.

В первой подопытной группе (больные телята) лизоцимная активность увеличивалась после выпойки молозива, на 2-й день в 1,97 раза, на 5-й день в 1,41 раза и на 10-й день в 1,89 раза. На 30-й день лизоцимная активность существенно не отмечалась от уровня ее у телят 2-дневного возраста.

Во второй подопытной группе (павшие телята) лизоцимная активность сывороток крови после выпойки молозива, на второй день увеличилась в 1,3 раза и на 5-й день в 1,25 раза. Увеличение было существенно недостоверным.

Таблица 3.24

Лизоцимная активность крови телят в зависимости от клинического статуса (X±m)

Возраст телят	Здоровые, n=10	Больные, n=10	Павшие, n=7
До поения молозива	1,49±0,007	1,49±0,005	1,49±0,006
2-й день	4,13±0,03	2,93±0,013	1,95±0,02
5-й день	4,21±0,01	2,10±0,03	1,87±0,015
10-й день	4,32±0,009	2,82±0,006	‑
20-й день	4,31±0,01	2,92±0,009	‑
30-й день	4,14±0,02	3,00±0,01	‑

3.7. Пропердиновая активность сыворотки крови

Большую роль в естественной резистентности организма играет пропердин, который обладает разносторонним биологическим действием, так, например, в присутствии комплемента и ионов магния он способен разрушить сальмонеллы, эшерихии, протей, псевдомонасы, шигеллы, сенную палочку. Полная инактивация пропердина происходит при 58°С в течение 30 мин. За единицу действия пропердина принимают то количество, которая способно инактивировать третий компонент комплемента в 1 мл сыворотки, лишенной пропердина [ И. М. Архангельский, 1976; П. А. Емельяненко, О. И. Грызлова, Г. Н. Печникова и М. Н. Тулупова, 1980; С. И. Плященко, В. Т. Сидоров, А. Ф. Трофимов, 1990].