Для достижения статистической достоверности результатов необходимо использовать репрезентативное количество образцов (повторностей) как в опыте, так и контроле.
При количественном определении содержания микроорганизмов подсчитываются все выросшие на плотных питательных средах после термостатирования колонии. Для подтверждения роста именно тест-культур, а также для изучения влияния полимерных материалов на биологические свойства микроорганизмов 2 - 3 колонии окрашивают по Граму и проводят изучение биологических свойств общепринятыми методами.
Сравнение количества колоний, выросших при посеве смывов с полимерных материалов, с количеством колоний в контроле позволяет определить степень влияния исследуемых образцов на жизнеспособность тех или иных используемых для заражения микроорганизмов. Учитывая динамику отмирания микроорганизмов на образцах за разные периоды времени, можно получить дополнительные данные о характере этого влияния.
4.6.2. Изучение антимикробной активности материалов
Определение уровня антимикробной активности полимерных материалов может проводиться с помощью трех методов:
а) диффузионного метода или метода "зон";
б) капельного метода;
в) аэрозольного метода.
Два последних метода являются количественными и в лабораторных условиях имитируют реальные условия эксплуатации и возможного заражения полимерных материалов инфекционными агентами.
В качестве тест-культур используются культуры микроорганизмов, выбор которых определяется целевым предназначением данного материала и поставленными задачами. Спектр микроорганизмов, по отношению к которым определяется антимикробная активность полимерного материала, как правило, довольно значительный и включает микроорганизмы, являющиеся этиологическими агентами инфекций с воздушно-капельным и фекально-оральным механизмами передачи.
При постановке диффузионного метода образцы полимерного материала одинакового размера накладывают на засеянную "газоном" поверхность питательного агара в чашках Петри. После выращивания культуры в течение времени и при температуре, оптимальных для данного микроорганизма, измеряют величину зоны задержки роста микроорганизма (от края образца до границы роста микроорганизмов) в миллиметрах. По величине этой зоны можно судить о наличии антимикробного действия материала.
Диффузионный метод используется, как правило, в качестве скринингового для отбора полимерного материала, являющегося перспективным для дальнейших исследований, и для определения культур, по отношению к которым антимикробная активность исследуемого материала будет изучаться более подробно.
С помощью капельного и аэрозольного методов можно проводить качественную и количественную оценку антимикробного действия полимерного материала, определяя не только степень антимикробного действия, но и его динамику во времени. Заражение поверхностей испытуемых материалов и контрольных образцов взвесью тест-культур с рассчитанной предварительно концентрацией микроорганизмов, отбор проб, посев на плотные среды, выращивание и учет результатов проводятся так же, как при определении сроков выживания. Время, через которое производится отбор проб после заражения испытуемых образцов, учитывая их антимикробное действие, существенно сокращается по сравнению с таковым в экспериментах по определению выживаемости микроорганизмов на полимерных материалах без антимикробных свойств. Пробы при использовании капельного метода отбирают после экспозиции в течение 10, 20, 30, 40, 50 и 60 минут, аэрозольного метода - через 16 - 18 часов. Сравнивая количество колоний в посевах смывной жидкости или на отпечатках с поверхности антимикробных и контрольных образцов полимерного материала, определяют процент гибели микроорганизмов.
Постановка капельного и аэрозольного метода при определении степени антимикробной активности материалов требует на протяжении всего времени экспозиции строго одинаковых условий температуры, освещенности и влажности для всех (опытных и контрольных) образцов. Количество взятых в опыт экземпляров опытных и контрольных образцов должно обеспечивать статистическую достоверность результатов.
4.6.3. Определение степени микробного загрязнения поверхностей полимерных материалов в процессе эксплуатации
Санитарно-бактериологический контроль при эксплуатации полимерных материалов может быть дополнен (по эпидемиологическим показаниям) определением степени бактериального загрязнения их поверхности. Для этого определяют количественное содержание сапрофитной микрофлоры, санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов, выбор которых зависит от конкретной эпидемиологической ситуации.
Способ отбора проб для исследований может зависеть от формы поверхности предметов, изготовленных из полимерных материалов. Отбор проб (методом смывов или отпечатков) и проведение исследований осуществляются так же, как и при изучении выживаемости тест-культур на полимерных материалах.
Приложение 1
Перечень веществ, подлежащих определению при санитарно-химических исследованиях основных типов полимерных строительных материалов
| № п/п | Наименование полимера, применяемого для изготовления материала | Вид строительного материала | Ориентировочный перечень выделяющихся веществ |
| 1 | Поливинилхлорид пластифицированный (суспензионный и эмульсионный) | Линолеумы, плиты, моющиеся обои, декоративные пленки, плинтусы, поручни, оконные рамы, двери и т.д. | Винил хлористый |
| Бензол | |||
| Толуол | |||
| Фенол | |||
| Гексен-1 | |||
| Четыреххлористый углерод | |||
| Метилен хлористый | |||
| Хлороформ | |||
| Трихлорэтилен | |||
| Гексил хлористый | |||
| Ксилолы | |||
| Кумол (изопропил-бензол) | |||
| Псевдокумол (1,2,4-триметилбензол) | |||
| Мезитилен (1,3,5-триметилбензол) | |||
| Анизол | |||
| Циклогексанон | |||
| Дибутилфталат | |||
| Диоктилфталат | |||
| Дидодецилфталат | |||
| Винилацетат | |||
| Спирты: | |||
| Бутиловый | |||
| Гексиловый | |||
| 2-Этилгексаналь | |||
| Этилацетат | |||
| Метилэтилкетон | |||
| Этилгексан | |||
| 2 | Фенолформальдегидные смолы | Древесно-стружечные и древесно-волокнистые плиты, фенопласты | Формальдегид |
| Фенол | |||
| Метанол | |||
| Аммиак | |||
| 3 | Карбамидные смолы | Древесно-стружечные и древесно-волокнистые плиты | Формальдегид |
| Метанол | |||
| Аммиак (для мочевиноформальдегидных смол) | |||
| Анилин (для анилиноформальдегидных смол) | |||
| 4 | Синтетические каучуки на основе бутадиена и сополимеров бутадиена с акрилонитрилом и стиролом | Резиновые линолеумы, резиновые плиты, коврики, пенорезиновые основы синтетических ковров | Бутадиен (диваинил) |
| Бензол | |||
| Толуол | |||
| Акрилонитрил (для бутадиен-нитрильных каучуков) | |||
| Стирол | |||
| Альфа-метилстирол (для бутадиен-стирольных каучуков) | |||
| Этилбензол | |||
| Сероуглерод | |||
| Ацетальдегид | |||
| Ацетон | |||
| Метиловый спирт | |||
| Бутиловый спирт | |||
| Ксилолы | |||
| Изопрен | |||
| Метилметакриловая кислота | |||
| 5 | Полистирольные пластики | Плитка для отделки стен, декоративные панели, решетки, пленки, пенопласты и т.д. | |
| 5.1 | Полистирол (блочный, суспензионный, ударопрочный) | Стирол | |
| Метанол | |||
| Формальдегид | |||
| Бензол | |||
| Толуол | |||
| Этилбензол | |||
| 5.2 | Сополимер стирола с акрилонитрилом | Стирол | |
| Акрилонитрил | |||
| Формальдегид | |||
| Бензальдегид | |||
| 5.3 | АБС-пластики | Стирол | |
| Акрилонитрил | |||
| Альфа-метилстирол | |||
| Бензол | |||
| Толуол | |||
| Этилбензол | |||
| Бензальдегид | |||
| Ксилолы | |||
| Кумол | |||
| 5.4 | Сополимер стирола с метакрилатом | Стирол | |
| Метилметакрилат | |||
| Метанол | |||
| Формальдегид | |||
| 5.5 | Сополимер стирола с альфаметилстиролом | Стирол | |
| Альфа-метилстирол | |||
| Бензальдегид | |||
| Ацетофенон | |||
| 5.6 | Сополимер стирола с бутадиеном | Стирол | |
| Бутадиен | |||
| Ацетальдегид | |||
| Ацетон | |||
| Метанол | |||
| Бутанол | |||
| Ксилолы | |||
| 5.7 | Вспененные полистиролы | Стирол | |
| Альфа-метилстирол | |||
| Бензол | |||
| Толуол | |||
| Этилбензол | |||
| Кумол | |||
| Метанол | |||
| Формальдегид | |||
| 6 | Полиуретаны | Жесткие и мягкие пенопласты, клеи, лаки, герметики | Бутадиен |
| Толуилендиизоцианат | |||
| Этиленгликоль | |||
| Бензол | |||
| Этилацетат | |||
| Бутилацетат | |||
| Изобутилацетат | |||
| Ацетон | |||
| Этанол | |||
| Бутанол | |||
| 7 | Эпоксидные смолы | Стеклопластики, клеи, грунты, пенопласты, лакокрасочные покрытия, шпатлевка | Эпихлоргидрин |
| Фенол | |||
| Дифенилолпропан | |||
| Формальдегид | |||
| Дибутилфталат | |||
| Ацетон | |||
| Этилбензол | |||
| Ксилолы | |||
| Этанол | |||
| Бутанол | |||
| Аммиак | |||
| Этилендиамин | |||
| Этаноламин | |||
| Гексаметилендиамин | |||
| Малеиновый ангидрид | |||
| Фталевый ангидрид | |||
| 8 | Полиэфирные смолы | Стеклопластики, лаки, клеи | Этиленгликоль |
| Диэтиленгликоль | |||
| Стирол (для полиэфирных смол, отвержденных стиролом) | |||
| Этилбензол (для полиэфирных смол, отвержденных стиролом) | |||
| Растворители | |||
| Фталевый ангидрит | |||
| 9 | Полимеры на основе винилового спирта и его производных | Клеи, краски, лаки, герметики, грунты | |
| 9.1 | Поливинилацетат | Уксусная кислота | |
| Ацетон | |||
| Этилацетат | |||
| Бензол | |||
| Дибутилфталат | |||
| Диоктилфталат | |||
| Винилацетат | |||
| 9.2 | Поливинилацетат с добавкой карбамидной смолы | Ацетон | |
| Этилацетат | |||
| Бензол | |||
| Дибутилфталат | |||
| Диоктилфталат | |||
| Винилацетат | |||
| Формальдегид | |||
| Метанол | |||
| 9.3 | Поливиниловый спирт | Ацетон | |
| Этилацетат | |||
| Бензол | |||
| Дибутилфталат | |||
| Диоктилфталат | |||
| Винилацетат | |||
| Метанол | |||
| 9.4 | Поливинилацетат | Ацетон | |
| Этилацетат | |||
| Бензол | |||
| Дибутилфталат | |||
| Диоктилфталат | |||
| Винилацетат | |||
| Формальдегид | |||
| Ацетальдегид | |||
| Метанол |
Приложение 2