2.3.3 Результаты специфического подавления ретракции кровяного сгустка
Нами, на основании аллергического исследования, были отобраны реагирующие и не реагирующие на туберкулин животные для испытания значимости ретракции кровяного сгустка по методике М.В. Харитонова (1998). Данные представлены в таблице 8.
Анализ таблицы 8 показывает, что индекс ретракции после внутрикожного введения ППД – туберкулина составлял в контрольной группе 0,60 до 0,72 мл, двукратного 0,58 – 0,67 мл. И внутривенного введения 0,58 – 0,72 мл.
Таблица 8 - Результаты специфического подавления ретракции кровяного сгустка
| п/п | Инвентарный номер, № | Интенсивность реакции, (мм.) | ИР, после введения ППД-туберкулина в/м, (мл.) | ИР, после 2- кратного введения ППД-туберкулина в/к, (мл.) | ИР, после введения ППД-туберкулина в/в, (мл.) |
| Контрольная группа (не реагирующие) | |||||
| 1 | 0780 | - | 0,70 | 0,65 | 0,68 |
| 2 | 1420 | - | 0,60 | 0,62 | 0,61 |
| 3 | 2111 | - | 0,65 | 0,61 | 0,62 |
| 4 | 0918 | - | 0,66 | 0,65 | 0,63 |
| 5 | 1520 | - | 0,72 | 0,67 | 0,68 |
| 6 | 1039 | - | 0,60 | 0,58 | 0,58 |
| 7 | 1536 | - | 0,61 | 0,62 | 0,60 |
| 8 | 1213 | - | 0,64 | 0,66 | 0,64 |
| 9 | 1620 | - | 0,70 | 0,65 | 0,72 |
| 10 | 1240 | - | 0,61 | 0,62 | 0,62 |
| Опытная группа (реагирующие) | |||||
| 1 | 1340 | 7 | 0,46 | 0,44 | 0,48 |
| 2 | 2400 | 5 | 0,40 | 0,43 | 0,46 |
| 3 | 1310 | 3 | 0,43 | 0,49 | 0,50 |
| 4 | 1380 | 3 | 0,51 | 0,52 | 0,52 |
| 5 | 1050 | 4 | 0,60 | 0,61 | 0,60 |
| 6 | 1160 | 6 | 0,53 | 0,49 | 0,51 |
| 7 | 2120 | 3 | 0,50 | 0,48 | 0,52 |
| 8 | 0870 | 3 | 0,70 | 0,66 | 0,68 |
| 9 | 1250 | 4 | 0,60 | 0,61 | 0,62 |
| 10 | 1130 | 5 | 0,53 | 0,50 | 0,52 |
В опытно группе после внутрикожного введения ППД – туберкулина данный показатель установили у 7 животных 0,40 – 0,59 мл, двукратного введения 0,43 – 0,50 мл, то есть он имеет меньшую величину, чем у контрольных животных.
Индекс ретракции после внутривенного введения ППД – туберкулина составил у 6 животных от 0,46 – 0,52 мл. Из таблицы видно, что в опытной группе у 7 коров индекс ретракции меньше 0,6 мл.
Таким образом, у опытных животных (реагирующих на внутрикожное, двукратное и внутривенное введение аллергена) ретракция кровяного сгустка имела меньшую величину (от 0,40 до 0,53 мл). Данные животные убиты с диагностической целью, при послеубойном осмотре изменений характерных для туберкулеза не обнаружено. В лаборатории кафедры эпизоотологии провели бактериологический анализ проб биоматериала от 7 реагирующих на туберкулин коров, у которых индекс ретракции составлял 0,40; 0,43; 0,46; 0,50; 0,51; 0,53 (2 головы). Посевы проводили на твердую среду Мордовского и на полужидкую среду Школьниковой (для выделения Л – форм микобактерий).
2.3.4 Бактериологический анализ биоматериалов
Основным методом диагностики туберкулеза является бактериологический, который включает микроскопию мазков, выделение чистой культуры.
Бактериологические исследования биоматериала проводят с целью установления диагноза и в период неблагополучия хозяйств, для контроля эффективности мероприятий.
По истечении срока наблюдения из культур готовили мазки, окрашивали по Циль – Нильсену и микроскопировали. Бактериальные формы были представлены палочками, располагающимися одиночно или кучками, Л – формы – в виде малых и больших шароподобных структур, неравномерно окрашенных в синий или фиолетовый цвет.
Таблица 9 - Результаты бактериологических исследований биоматериала
| Инвентарныйномер | ИР, мл. | Характер изменений биоматериала | Выделена на среде | |
| Мордовского (бактериальные культуры) | Школьника(Л-формы) | |||
| 1340 | 0,46 | - | + | - |
| 2400 | 0,40 | - | + | - |
| 1310 | 0,43 | - | - | + |
| 1318 | 0,51 | - | - | + |
| 1160 | 0,53 | - | + | - |
| 2120 | 0,50 | - | - | + |
| 1130 | 0,53 | - | - | + |
Как видно в таблице 9, из проб биоматериала у всех 7 убитых животных выделены микобактерии. В 3 случаях бактериальные культуры, в 4 случаях Л – формы.
Для дальнейшего изучения было отобрано 4 культуры Л – форм. Учитывая, что основной биологической особенностью их является реверсия в бактериальное состояние, нами проведено пассирование культур на плотные и полужидкую среду Школьниковой (всего три пассажа). В обычное бактериальное состояние реверсировали 2 культуры, 2 культуры рост утратили на первом – втором пассаже.
Видовую принадлежность у выделенных бактериальных культур и культур – ревертантов Л – форм изучили, используя культуральный и биохимический методы. Учитывая, что основным возбудителем туберкулеза крупного рогатого скота является M. bovis дифференциацию этих видов в первую очередь проводили с использованием следующих тестов:
- характер роста на плотных средах;
- скорость роста при разных температурах;
- образование пигмента на свету и в темноте;
- рост на средах с салициловым натрием.
По результатам идентификации все культуры отнесены к атипичным микобактериям. Бактериальные культуры были представлены: M. terrae (2), M. sсrofulaccum, M. intracellularae, M. smegmatis.
Таблица 10 - Результаты биохимической идентификации микробактерий, выделенных от животных благополучных хозяйств
| п/п | Рост при t0 | Салициловый натрий | Амиды | Вид микобактерий | ||||||||||||||
| 220 | 370 св. | 370 тем. | 450 | 500 | 1000 | К | Ацетамид | Мочевина | Никотинамид | Пиразинамид | Сукцинамид | Аллонтаин | Твин 80 | Арилсульфатазная активность | Нитратредуктаза | Ниациновый тест | ||
| Бактериальные культуры | ||||||||||||||||||
| 1 | + | + | + | - | + | + | + | - | - | ± | ± | - | ± | + | - | + | - | M. terrae |
| 2 | + | + | + | - | - | - | + | + | - | - | - | ± | - | - | M. scrofulaceum | |||
| 6 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | + | + | + | + | - | M. smeq-matis |
| Культуры ревертанты | ||||||||||||||||||
| 3 | + | + | + | - | + | + | + | - | - | ± | ± | - | ± | + | - | + | - | M. terrae |
| 7 | + | + | + | + | + | + | + | - | - | + | + | - | - | - | + | - | - | M. intracellularae |
Таким образом, из биоматериала коров реагирующих на туберкулин нами выделены атипичные микобактерии и их Л – формы.
2.4 Экономическая оценка результатов исследований
Экономический ущерб в данном случае складывается из недополучения молодняка и приплода в результате преждевременной сдачи на убой реагирующих животных.
Нами рассчитаны экономические показатели за 2000 год.
1. Экономический ущерб от вынужденного убоя:
У1=М×Ж×Ц,
Где М - количество вынужденно убитых животных, голов;
Ц - закупочная цена единицы продукции, рублей;
Ж – средняя масса животного, кг.
У1=37×400×45=666000 рублей
2. Экономический ущерб от недополучения продукции (молочной), в результате преждевременной сдачи коров на убой:
У2=М×КП×Ц,
Где М – количество вынужденно убитых животных, голов;
КП – коэффициент потери основной продукции (молока), кг;
Ц – закупочная цена единицы продукции, рублей.
У2=37×0,63×5000=116550 рублей
3. Общий экономический ущерб:
У=У1+У2=666000+116550=782550 рублей
Заключение
При изучении данных ветеринарной отчетности было установлено, что СПК «Ново-Варненское» Варненского района является благополучным по туберкулезу крупного рогатого скота. В системе профилактических мероприятий применяют вакцину БЦЖ телятам в возрасте 10-20 дней. Приведенные в обзоре литературы данные свидетельствуют о том, что массовым и пока единственным методом прижизненной диагностики считается аллергическая проба. При плановых диагностических исследованиях выявляются реагирующие животные, однако характерных патологоанатомических изменений на вскрытии не обнаруживают. Результатами лабораторных исследований диагноз не подтверждается. В нашем случае выявляемость реагирующих на туберкулин животных составила в 1999 году 1,31%, в 2000 году 1,60% от числа исследованных животных. Нами исследован биоматериал от 7 реагирующих коров, у всех убитых животных выделены микобактерии. По результатам идентификации все культуры отнесены к атипичным микобактериям. Бактериальные культуры были представлены: M. terrae (2), M. sсrofulaccum, M. intracellularae, M. smegmatis.
Для более достоверного отбора, нужных для контрольного убоя из числа реагировавших на туберкулин, мы брали кровь и непосредственно в хозяйстве ставили реакции специфического подавления кровяного сгустка метод М.В. Харитонова (1998).