Смекни!
smekni.com

Спермограмма как метод лабораторной диагностики (стр. 3 из 4)

Снижение числа подвижных сперматозоидов называется астенозооспермия. Существует множество классификаций степени астенозооспермии:

· Если суммарный процент прогрессивно–подвижных сперматозоидов (a + b) составляет менее 50%, то такую астенозооспермию считают слабовыраженной.

· Если это значение меньше 40%, то говорят об умеренной астенозоооспермии.

· И если имеется лишь 30% подвижных сперматозоидов, то тогда говорят о выраженной астенозоооспермии.

Причин, которые в той или иной степени действуют на показатели подвижности, множество. Это могут быть как экзогенные, так и эндогенные факторы. Из экзогенных стоит выделить следующие:

· неблагоприятные факторы внешней среды,

· различные токсические влияния,

· колебания климатических показателей,

· злоупотребление алкоголем,

· курение,

· действие электромагнитного излучения,

· неблагоприятные условия работы.

Из эндогенных факторов в первую очередь стоит отметить различные аномалии строения и функционирования жгутикового аппарата сперматозоидов. Среди них известны генетические нарушения, которые изменяют нормальное строение аксонемы и ферментопатии, что приводит к нарушениям энергетических процессов, происходящих во время движений жгутиков. Часто это клеточные нарушения, например, патология митохондрий.

Кроме того, известно, что хронические воспалительные процессы придаточных половых желез (вызванные как специфической, так и неспецифической урогенитальной инфекцией) оказывают существенное отрицательное влияние на подвижность сперматозоидов. Это обусловлено токсическим влиянием продуктов воспаления, замещением соединительной тканью функционирующей части желез, а также уменьшением секреции в придатке яичка так называемых андроген-зависимых факторов, необходимых для обеспечения механизмов подвижности сперматозоидов. Также не исключен такой фактор, как аутоиммунный процесс, приводящий к нарастанию титра антиспермальных антител.

Оценка жизнеспособности сперматозоидов

Оценка жизнеспособности сперматозоидов проводится следующим образом: после разжижения сперма перемешивается пипеткой, далее на предметное стекло помещается капля неразведенного эякулята. На препарат наносится 1% водный раствор эозина.

Лучшим методом окраски считается окраска по Блуму. На предметное стекло рядом с каплей спермы помещают вдвое большую каплю 5% раствора эозина и каплю 10% водного раствора нигрозина, вдвое большую, чем капля эозина. Сначала эякулят смешивают с каплей эозина, выжидают несколько секунд. Далее препарат смешивают с каплей нигрозина и снова выжидают. После чего делается мазок, аналогичный мазку крови. После высушивания приступают к микроскопии.

Препарат накрывается обычным покровным стеклом и через 2 минуты микроскопируется при увеличении 400х (объектив 40х, окуляр 10х). Конденсор микроскопа вначале опускается. Поскольку живые сперматозоиды не окрашиваются, а мертвые окрашиваются в розовый цвет, то достаточно просто их отличить друг от друга. Подчитывается общее число сперматозоидов в поле зрения (желательно не менее 500). Далее конденсор поднимается и ведется подсчет мертвых сперматозоидов. Процентное содержание мертвых сперматозоидов определяется по формуле:

Cмертв. = C розовые/C общие * 100%.

В норме число живых сперматозоидов должно быть более 75%, однако неоднократно наблюдается наступление беременности и при меньших значениях. Повышение числа мертвых сперматозоидов свыше 25% носит название – некрозооспермия. Причины появления мертвых сперматозоидов различны и до конца не выяснены. Возможно, что это связано с патологией придатка яичка.

Иногда используется индекс нормальных подвижных сперматозоидов (ИНПС) определяется по формуле:

ИНПС = V * C * A * B/106,

где V – это объем эякулята,

C – концентрация сперматозоидов,

A – процент сперматозоидов с прогрессивной подвижностью (a +b) и

B – процент морфологически нормальных сперматозоидов.

Если значения индекс нормальных подвижных сперматозоидов больше или равен 6*104, то это говорит о нормальной фертильности.

Оценка морфологии сперматозоидов

Оценка морфологии сперматозоидов (сперматограмма) проводится на неокрашенных препаратах, после обездвиживания в счетной камере. Морфологическая структура сперматозоидов является важным критерием диагностического звена, поскольку наряду с подвижностью этот параметр определяет фертильность спермы. Исследование желательно проводить при помощи фазово-контрастного микроскопа. Анализируется тот же препарат, что и для оценки подвижности клеток.

Проводится подсчет общего числа сперматозоидов в 5 больших квадратах камеры. При этом вначале можно определить число сперматозоидов с ненарушенной подвижностью и нормальным морфологическим строением. Затем изучается процент этих сперматозоидов от общего числа. Также для исследования приготавливается окрашенный препарат (мазок). Для этого используют предметные стекла, которые обезжириваются путем обработки 700 спиртом. На высушенное стекло наносится капля эякулята после полного разжижения. Капля разносится по поверхности стекла с помощью другого, краем, под углом в 450. Необходимо этот процесс осуществлять деликатно, что бы не допустить раздавливания препарата. Распределение материала на стекле происходит за счет капиллярных сил.

Микроскопия вначале проводится при малом увеличении. В норме в поле зрения микроскопа должно быть не менее 30 сперматозоидов, равномерно распределенных по стеклу. Окраска препарата выполняется гематоксилин-эозином. Также используется метод окраски по Папаниколау, Шору и Май-Грюнвальду-Гимзе. Исследование наиболее информативно при окраске по Папаниколау.

Мазки микроскопируют при большом увеличении 900х (иммерсионный объектив 90х, окуляр 10х). Процент морфологически нормальных сперматозоидов определяется по формуле:

N/C * 100%,

где C это число всех подсчитанных сперматозоидов,

N – число сперматозоидов с нормальной морфологией.

Общее число аномальных сперматозоидов вычисляется следующим образом:

C – N.

Эта цифра принимается за 100% для подсчета в процентном соотношении сперматозоидов с различной формой аномалии.

Например, для подсчета сперматозоидов с аномалией головки в процентах используется формула:

G/C – N * 100%,

где G – это число сперматозоидов с атипией головки,

C – это число всех подсчитанных сперматозоидов,

N – число сперматозоидов с нормальной морфологией.

Точно таким же образом идет подсчет числа сперматозоидов с патологией шейки и жгутика.

Затем определяется индекс тератозооспермии (количество дефектов, разделенное на общее число аномальных сперматозоидов).


Варианты морфологии сперматозоидов

Морфологически нормальными сперматозоидами считают такие сперматозоиды, которые имеют овальную головку, хорошо различимую акросому и жгутик. Головка может быть заострена.

В мире общепринятым определением нормального сперматозоида является правило Kruger, которое гласит: «нормальный сперматозоид – это такой, который обнаруживается в верхнем отделе цервикального канала женщины через 8 часов после полового акта». Данное утверждение основано на том, что при этой локализации сперматозоида в половых путях женщины уже произошел естественный отбор нормальных форм сперматозоидов из всего пула.

Во время проведения исследования выделяют так называемые патологические формы сперматозоидов, которые могут быть представлены следующими вариантами:

1. С атипичным строением головки.

В свою очередь различают аномалии размеров головки – макроцефалия (большая головка) и микроцефалия (маленькая головка). Могут быть варианты аномалий формы головки (каплевидная, круглая, веретенообразная, грушевидная, аморфная, резко-заостренная). Здесь же могут встречаться сперматозоиды с неправильным строением акросомы (слишком маленькая акросома, занимающая менее 40% площади головки; несимметричная акросома; вакуолизированная акросома). Головка сперматозоида может быть резко вакуолизирована, что также считается аномалией. Нередки сперматозоиды с двумя (и более) головками, а также сперматозоиды, имеющие множество ядер.

2. С атипичной шейкой.

Среди них различают сперматозоиды с утолщенной шейкой. Также аномальными считаются сперматозоиды, у которых угол между головкой и жгутиком менее 1800.

3. Имеющие цитоплазматические капли в области шейки или головки (более половины головки).

4. С атипичным строением жгутика.

Среди них выделяют короткий жгутик. Также могут быть сперматозоиды с изломанной формой жгутика, неравномерной толщины, закрученными жгутиками.

5. Имеющие более одного дефекта (сочетают в себе несколько аномалий одновременно).

По критериям ВОЗ число морфологически нормальных сперматозоидов не должно быть менее 30%. Повышение числа патологических форм носит название тератозооспермия. Абсолютно точные причины тератозооспермии неясны. Возможно, что это связано с наличием вирусных инфекций, ферментопатий, хромосомных нарушений.

Исследование «круглых» клеток

Под «круглыми» клетками понимают все клеточные структуры эякулята, кроме сперматозоидов. К ним относятся:

1. Лейкоциты.

2. Макрофаги.

3. Незрелые половые клетки.

4. Эпителиальные клетки.

5. Дегенеративные клеточные формы.

6. Эритроциты (выявляются только при патологиях).

Это исследование выполняется путем микроскопии окрашенных препаратов или же нативных препаратов в счетной камере. Для окраски рекомендуется использовать метод Май-Грюнвальда-Гимзе.

Лейкоциты

При микроскопии эякулята определяют и подсчитывают клетки – лейкоциты. Исследование выполняется при микроскопии нативных и окрашенных препаратов. При этом нейтрофильные лейкоциты выглядят с несколько неровным выраженным контуром. Иногда встречаются комплексы агрегатов лейкоцитов – скопления клеток от нескольких штук до нескольких десятков. Их определение говорит о наличии активного воспалительного процесса придаточных половых желез.