Понятие о пищевых добавках и их характеристика (стр. 14 из 15)
При анализе напитков исключают стадию отгонки, 10 см3 напитка разбавляют вдвое 0,5 М H2SO4, добавляя 10 г Na2SO4, интенсивно перемешивают и экстрагируют БК и СК 3 раза по 5 см3 этилацетатом. Объединенный экстракт V1 сушат 1 г безводного прокаленного Na2SO4. Экстракт упаривают на роторном испарителе или в фарфоровой чашке до конечного объема 1 см3. Хроматографическое разделение в тонком слое. Готовят смесь растворителей, включающую петролейный эфир, хлороформ, диэтиловый эфир и муравьиную кислоту в соотношении объемов 20,0:8,0:2,8:1,2 соответственно и заливают в камеру для тонкослойной хроматографии. Пластинку «Силуфол УФ 254» размечают мягким простым карандашом, определяя на линии старта 6 зон длиной 2...3 мм для нанесения исследуемых растворов. На разметки 1, 2, 5, 6 наносят по 1, 2, 4 и 8 мкл раствора 3, при этом количество БК в них составляет 2, 4, 8 и 16 мкг, а СК — 0,2; 0,4; 0,8 и 1,6 мкг соответственно. На разметки 3 и 4 наносят 3 и 10 мкл экстракта. Нанесение проб проводят микрошприцем, калиброванным капилляром, постоянно подсушивая поддувом воздухом с помощью фена. Пластинку опускают в камеру и хроматографируют до 15 см от линии старта. Затем пластинку вынимают, подсушивают и рассматривают в УФ-свете с волной 254 нм. Наличие в хроматограмме экстракта темных пятен, совпадающих значению Rfсоответствующим стандартам, свидетельствует о приcутствии этих консервантов в анализируемом образце. Пятна в экстракте сравнивают с пятнами стандартов визуально и ориентировочно оценивают содержание бензойной и сорбиновой кислот в пробе. Темные пятна в экстракте и стандартах обводят карандашом в УФ-свете. Идентификация и подтверждение наличия бензойной и сорбиновой кислот. Для обнаружения бензойной кислоты высушенную пластинку разрезают между 3 и 4 стартовыми зонами. Одну часть опрыскивают раствором хлорного железа, а затем — пероксида водорода и нагревают 2 минуты при 80...100°С в сушильном шкафу. Появление буро - фиолетовой окраски пятен на хроматограмме экстракта, по цвету и Rfсоответствующих пятнам в стандарте БК, подтверждает наличие БК в пробе. Для обнаружения сорбиновой кислоты вторую часть пластинки опрыскивают раствором К2Сг2О7 в H2SO4, подсушивают, опрыскивают раствором 2-тиобарбитуровой кислоты и нагревают 5 мин. при 100 °С в сушильном шкафу. Появление малиновой окраски пятен на хроматограмме экстракта, по цвету и Rfсоответствующих пятнам и стандарте СК, подтверждает ее наличие в пробе. Количественное определение бензойной и сорбиновой кислот при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии. Экстракт, содержащий выделенные бензойную и сорбиновую кислоты, и раствор стандарта 3 поочередно вводят в жидкостный хроматограф «Милихром» с колонкой 60x2 мм, (неподвижная фаза — «Силасорб 600», 5 мкм) при следующих условиях работы: состав элюента — изооктан:диэтиловый эфир:уксусная кислота в соотношении 100:12:0,1, расход элюента 200 мкл/мин, детектирование в УФ-спектре при 254 нм, объем видимой пробы 10 мкл, скорость ленты самописца JIKC — 4300 мм/ч. Нa хроматограмме экстракта идентифицируют пики БК и СК по времени удерживания стандартов: для БК — 3,4 мин, для СК — 4,4 мин.
Для подтверждения правильности идентификации аликвоты раствора 3 и экстракта вводят в тех же условиях повторно, регистрируя в максимумах хроматографических пиков спектр поглощения БК ( 250...270 нм) и СК (230...270 нм). БК имеет три максимума поглощения в указанном интервале спектра — 268, 270 и 272 нм, а СК — один —
254 нм, что является дополнительным идентификационным признаком для подтверждения присутствия их в образце.Измеряют высоту пиков стандартов БК и СК и рассчитывают их содержание в мг/кг или мг/дм3 по формуле (до второго десятичного знака) 4
где К — коэффициент, учитывающий потери при извлечении, равный при перегонке с паром и экстракции для БК — 1,2, для СК— 1,25; Р— коэффициент БК и СК в растворе стандарта (раствор 3), мг/см3; Н0 — высота пика БК и СК на хроматограмме экстракта, мм; Нст — высота пика БК и СК на хроматограмме стандартов, мм; Vt— объем экстракта, см3; М— масса продукта, взятого на анализ, г.
Относительные допустимые расхождения результатов определения зависят от содержания консерванта в пробе анализируемого образца, они не должны превышать значения, указанные в таблице:
| Содержание, мг/кг | Бензойная кислота | Сорбиновая кислота |
| До 300Свыше 300 | 2015 | 2015 |
За конечный результат данных испытаний принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Окончательный результат округляют до первого десятичного знака. Относительные допустимые расхождения результатов определениях не должны превышать 15 %.
2.6. Определение уротропина в пищевых продуктах
Уротропин в среде изопропилового спирта взаимодействует с изопропаноловым раствором хлороводородной кислоты. Вследствие изменения концентрации определяемого вещества в процессе титрования происходит изменение электропроводности раствора: наиболее резкое — вблизи точки эквивалентности. В качестве катода используют вращающийся медный электрод, в качестве анода — медную пластинку.
Реактивы и материалы: пищевой продукт, колба на 25 мл, изопропиловый спирт абсолютный, НС1, амперометрическая титровальная установка.
Ход работы. Пробу пищевого продукта массой 15,00 г растирают и переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят до метки изопропанолом. В стакан для титрования пипеткой отбирают 2 мл этого раствора, 15 мл изопропилового спирта и опускают электроды. Включают катодный мотор (частота вращения катода 600—900 об/мин). Устанавливают напряжение —2,0 В и титруют уротропин 1М изопропаноловым раствором хлористоводородной кислоты, приливая его из микробюретки порциями по 0,1—0,2 мл. После каждой прилитой порции фиксируют показания гальванометра. На основании результатов титрования строят кривую зависимости: показания гальванометра — объем титранта (мл). По кривой находят объем титранта, соответствующий точке эквивалентности. Содержание уротропина в процентах: ω% = NHCIVHCI Эуротропина Vт.э. ∙ 100/(1000Vaa).
2.7 Определение содержания фенольных соединений в рыбных копченостях
При взаимодействии с 4-аминоантипирином в слабощелочном растворе в присутствии ферроцианида (III) калия фенолы и их производные дают красную окраску.
Ход работы. В ступку помещают 55 г исследуемого продукта и растирают его с дистиллированной водой, затем переносят в круглодонную колбу на 1 л. Остатки кашицы смывают дистиллированной водой с тем расчётом, чтобы общее количество воды в колбе составило 700-750 мл. Затем в колбу добавляют 5 мл 10%-ного раствора винной кислоты и отгоняют фенолы с водяным паром при нагревании колбы на кипящей насыщенной солевой бане. Дистиллят собирают в мерную колбу на 200 мл. Из него отбирают 100 мл в коническую колбу на 250 мл, нейтрализуют МgCO3 до рН 7,2-7,3 и жидкость отгоняют. Отгонку производят при нагревании колбы на асбестовой сетке до тех пор, пока в колбе не останется сухой остаток; дистиллят собирают в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки водой, пипеткой отбирают 50 мл в коническую колбу на 250 мл с пришлифованной пробкой, куда приливают также 0,3 мл раствора 4-аминоантипирина и 1 мл р-ра NH3, содержимое колбы энергично перемешивают, приливают 1 мл раствора ферроцианида калия и вновь энергично взбалтывают. Затем замеряют оптическую плотность раствора на ФЭК-2 с зелёным светофильтром (λ = 500 нм). Нулевую точку прибора определяют с помощью контрольного раствора, состоящего из 500 мл дистиллированной воды с добавлением указанных реактивов.
Калибровочный график для количественного расчёта фенольных соединений строят по гваяколу. В стандартных растворах концентрация гваякола составляет 0,001; 0,002; 0,003;…; 0,007 мг/мл.
2.8 Определение содержания нитритов и нитратов в мясных продуктах
Сущность метода основана на реакции с реактивом Грисса с образованием азосоединения.
Приборы и реактивы: фотоэлектрокалориметр, редукционная колонка с губчатым кадмием, CdSO4 20%, цинк металлический гранулированный, 0,14 н NaOH, ZnSO4 0,45%-ый, 2,5% NH4OH, 0,1 н НС1, [кислота сульфаниловая, кислота уксусная 12% раствор, ά-нафтиламин], 0,14 н КMnO4, H2SO4, натрий серноватокислый, крахмал 0,5% раствор, KI, вода дистиллированная. Стандартный раствор Na(K)NO3: 0,1 г соли (перекристаллизованной и высушенной до постоянной массы при 105°С) взвешивают на аналитических весах, переносят дистиллированной водой в мерную колбу на 1000 мл, доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Затем 25 мл этого раствора переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят до метки и перемешивают. Стандартный раствор NaNO2. Отвешивают 1,0204 г ч.д.а. реактива, переносят в мерную колбу на 1000 мл и ее объем до метки. Затем переносят пипеткой 100 мл в мерную колбу на 1000 мл и объем ее доводят до метки. Из него переносят пипеткой 100 мл в мерную колбу на 500 мл и доводят до метки (раствор I). 5 мл раствора I переносят в мерную колбу на 100 мл и объем ее доводят до метки (образцовый). 1 мл его содержит 0,001 мг азотистокислого натрия.