Методические указания к занятиям спецпрактикума по разделу (стр. 4 из 8)

Существуют несколько способов стерилизации:

1) стерилизация насыщенным паром под давлением (табл. 2);

Таблица 2

Соотношение температуры насыщенного пара и давления

при стерилизации питательных сред

Давление, атм		Температура, °С
Нормальное	Добавочное
1,0	–	100
1,0	0,5	112
1,0	1,0	121
1,0	1,5	128
1,0	2,0	134

2) стерилизация сред фильтрованием через мелкопористые фильтры. Применяются бактериологические фильтры Зейтца, мембранные фильтры. Фильтрующая способность их определяется размерами пор и степенью пористости. Метод необходим в тех случаях, когда среды не выдерживают нагревания (например, среды, содержащие белки);

3) химическая стерилизация. Среду выдерживают 7 ч с 0,1 %-ной перекисью водорода при температуре 45 °С;

4) стерилизация с помощью антибиотиков. Этим методом пользуются в тех случаях, когда стремятся освободиться от одних групп микроорганизмов при сохранении других и для уменьшения обсемененности материала;

5) стерилизация током высокой частоты, ультразвуком, ИК-лучами.

Задание:

1. Приготовить среду Чапека, картофельно-глюкозный, овсяный агар.

2. Разлить охлажденную до 45 °С среду в чашки Петри (по 12 чашек каждой среды) и пробирки (по 10 пробирок соответственно).

3. Высеять споры или мицелий грибов, выросших на пораженных объектах во «влажных камерах» на чашки Петри и поместить на агар стерильные пораженные ткани растений.

4. Выделить из предоставленного пораженного материала гриб Phytophthora infestans на ломтиках картофеля.

ЗАНЯТИЕ 3

Тема: Изучение культуральных и морфологических признаков, используемых в систематике грибов пор. Moniliales (Hyphomycetales).

Цель: Научиться описывать морфологические структуры грибов пор. Moniliales (Hyphomycetales) и измерять объекты при микроскопировании.

Оборудование: Микроскоп, бинокуляр, пенал с набором инструментов.

Материал: Чистые культуры грибов на средах либо пораженные органы и ткани растений с хорошо развитым спороношением.

I. Конидиеносцы (по Литвинову, 1969)

1. Характер расположения

Расположение поодиночке, свободно отстоящие друг от друга или объединенные в группы, но не сросшиеся (не спаянные) между собой.

Расположение группами, сросшиеся (спаянные) между собой в пучки – коремии.

Расположенные тесным слоем на подушковидных стромах, состоящих из рыхло сплетенных гиф мицелия (спороложа или спородохии), большей частью короткие.

2. Степень дифференциации

Отчетливо обособленные (дифференцированные), заметно отличающиеся от вегетативных гиф мицелия.

Мало или почти не отличающиеся от вегетативных гиф мицелия.

3. Тип ветвления

Неразветвленные (простые).

Разветвленные (моноподиально, симподиально, дихотомически, мутовчато, кистевидно и т.п.).

Моноподиальным называется такое ветвление, при котором боковые ветви отходят от главной центральной оси конидиеносца.

Симподиальное ветвление – это ветвление, при котором центральная ось конидиеносца прекращает свой рост, а боковая ветвь ее служит как бы продолжением центральной оси; от этой боковой ветви отходит боковая ветвь следующего порядка, тоже как бы продолжающая центральную ось, и т.д.. Таким образом, главная ось конидиеносца состоит из ветвей различных порядков.

Дихотомическим называется такое ветвление, при котором конидиеносец в точке роста разветвляется вилкообразно, обычно несколько раз, последовательно.

4. Окраска

Бесцветные, светло-, ярко- или темноокрашенные (оболочка и содержимое).

5. Разные принципы в строении и расположении конидиеносца

Положение (приподнимающиеся, прямостоячие, ниспадающие, стелющиеся).

Размеры (высота и толщина).

Форма и характер окончания (вершинка).

Поверхность оболочки (гладкая, шероховатая и др.).

Способ отхождения (от субстратных или воздушных гиф мицелия).

II. Конидии

1. Строение и окраска

Одноклеточные, двуклеточные или многоклеточные; с поперечными и продольными перегородками (муральные); наличие придатков.

Бесцветные, светло-, ярко- или темноокрашенные; окраска в массе.

2. Способ образования

Путем расчленения (распадения) недифференцированной или слабо обособленной гифы мицелия на отдельные клетки – конидии (споры).

Путем возникновения на более обособленных (дифференцированных) ответвлениях грибницы (т.е. конидиеносцах).

Акропетально или базипетально.

Экзогенно или псевдоэндогенно.

3. Расположение

Непосредственно на конидиеносце.

На фиалидах, стеригмах, зубчиках, выступах или веточках.

На интеркалярных расширенных клетках.

На вершине (апикально), с боков (плеврогенно).

Одиночные, в цепочках (параллельных, переплетающихся или соединенных в колонку) или собранные (скученные) в головки или гроздья и т.п.

4. Форма и структура оболочки (эписпория)

Цилиндрические, шаровидные, овальные, эллипсоидные, яйцевидные, продолговатые, грушевидные, булавовидные, обратно-булавовидные, серповидные, нитевидные, спиральнозагнутые, звездчатые и т.п.

Гладкая, шероховатая, шиповатая, бородавчатая, щетинистая и т.п.

III. Колонии (дернинки, дерновинки)

1. Характер строения, окраска и другие признаки

Строение: войлочные, бархатистые, шерстистые, пушистые, ватообразные, паутинистые, клочковатые.

Бархатистость колонии определяется плотно растущими спороносящими веточками, отходящими непосредственно от субстратного мицелия; пушистость – обильно развитым воздушным мицелием; шерстистость – большим количеством тяжей; шероховатость возникает в результате обильного образования коремий.

Поверхность: ровная, бугристая, складчатая, зональная.

Окраска наружной (верхней) поверхности колонии и ее изменения с возрастом культуры.

Окраска обратной (нижней) стороны колонии (реверзума).

Форма.

Характер края (цвет, ширина и контур).

Скорость роста (размеры колонии вдинамике).

Строение центральной части колонии: кратерообразная, куполообразная, плоская, наличие хохолка и т.д.

Наличие эксудата, его цвет.

2. Мицелий и его производные

Расположение, окраска, строение: воздушный, стелющийся по поверхности, погруженный в субстрат.

Размеры.

Окраска воздушного и субстратного мицелия.

Строение оболочки.

Степень ветвления, образование петель, анастомозов, склероциев, шнуров.

Диффузия пигмента в среду.

3. Споры вегетативного размножения (по Н.А. Наумову, 1952)

Хламидоспоры – отдельные участки гиф, обособившиеся от соседних частей мицелия и образовавшие вокруг себя утолщенную оболочку.

Оидии – короткие округлые или удлиненные членики отдельных веточек грибницы, быстро разъединяющиеся друг с другом.

Геммы – те же оидии, но с более плотной и обычно окрашенной оболочкой.

Бластоспоры – округлые клетки, размножающиеся почкованием (т.е. образованием небольшого вершинного, реже бокового бугорка, который дорастает до величины материнской клетки, а затем, потеряв с ней связь, становится независимым).

Артроспоры – четковидно возникающие споры, образующиеся путем нарастания основной клетки, расположенной на воздушной грибнице, и отходящей от нее в воздух, где они быстро распадаются.

Измерение объектов при микроскопировании

При измерениях с помощью микроскопа необходимы следующие измерительные приборы: окуляр-микрометром, объект-микрометром и счетной камерой.

Перед тем, как приступить к измерению при определенном увеличении микроскопа, необходимо установить значение одного деления окуляр-микрометра в микронах.

Для этого берут объект-микрометр, представляющий собой предметное стекло, в середине которого выгравирована шкала длиной в 1 мм, разделенная на 100 равных частей, каждая из которых соответствует 10 μ. Потом фокусируют микроскоп и добиваются предельно четкой видимости делений окуляр- и объект-микрометров. Далее при помощи препаратоводителя устанавливают объект-микрометр так, чтобы шкалы микрометров предельно точно совпадали. Отсчитывают, скольким делениям окуляр-микрометра соответствует определенное число делений объект-микрометра. Снова сдвигают объект-микрометр и снова так же устанавливают, производя такой же отсчет. Все полученные данные записывают в 2 колонки. Стараются отметить возможно большее количество совпадения делений и измеряют их 5-10 раз, в зависимости от однородности получаемых данных. Потом для каждого измерения производят расчет следующим образом: умножают первое число (количество делений объект-микрометра, (a) на 10 μ (поскольку каждое деление объект-микрометра равно 10 μ) и делят его на второе (количество делений окуляр-микрометра (в)). Таким образом получают величину одного деления окуляр-микрометра. Из каждой пары цифр берут результат и потом находят среднее (μ (микрон) 1 микрон = 1 микрометр).

(1)