3.2.4. Изучение кумулятивного действия. Исследование кумулятивного действия ЛС проводится методом Ю.С. Кагана с введением 1/10 ЛД50 или в тесте субхронической токсичности Лима и соавт. в модификации К.К. Сидорова.
3.2.5. Проведение подострого эксперимента. С целью ускоренного
обоснования ПДК целесообразно проведение подострого ингаляционного
(20 - 30-дневного круглосуточного) эксперимента с использованием 4
- 6 концентраций ЛС. В качестве первой исследуется концентрация,
равная Lim . Каждая из последующих концентраций должна быть
ac
меньше предыдущей в 6 - 10 раз (если вещество высококумулятивное)
или в 2,5 - 3 раза (если вещество малокумулятивное).
Интервал между обследованиями в течение подострого опыта определяется концентрацией и сроком проведения эксперимента. При воздействии высоких концентраций исследования биологических показателей проводятся с коротким интервалом времени (несколько часов). Для меньших концентраций, когда время наступления ожидаемого эффекта возрастает, интервалы между повторными исследованиями увеличиваются до 1 - 7 дней. На протяжении воздействия каждой концентрации проводится не менее 3 - 5 исследований, что позволяет установить время наступления определенных (стандартных) изменений изучаемых показателей у экспериментальных животных. В качестве стандартных принимаются изменения, соответствующие принятым в настоящее время критериям вредного действия в соответствии с методическими указаниями по обоснованию ПДК загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест [2].
3.3. Обоснование ориентировочных безопасных уровней воздействия ЛС
Для обоснования ОБУВ необходимы сведения о величинах ЛД50,
Lim , кумулятивном действии, характере действия вещества на кожу
ac
и слизистые оболочки глаз, сенсибилизирующем действии, значениях
терапевтических доз.
3.3.1. Обоснование ОБУВ проводится путем расчета [28, 49, 50]:
- по значениям минимальной суточной терапевтической дозы
(МСТД) и высшей допустимой суточной дозы (ВСТД);
- по параметрам токсикометрии (ЛД50 в/ж и в/б, Lim , K при
ac кум
введении 1/10 ЛД50, Z );
sp
- по установленным в законодательном порядке гигиеническим
нормативам (ПДК, ОБУВ) для воздуха рабочей зоны.
Для установления ОБУВ рекомендуется производить расчеты по
нескольким уравнениям с последующим вычислением
среднегеометрической величины с учетом значимости (весового
коэффициента) уравнения:
SUM Y x W
i i
lg ОБУВ = -----------, (31)
SUM W
i
где:
Y - величина ОБУВ (в логарифмических единицах), полученная по
i-уравнению;
W - весовой коэффициент.
i
3.3.2. Ограничения для расчета ОБУВ по величине МСТД и ВСТД
см. в п. 2.2.6.2.
3.3.3. Расчет величины ОБУВ по значению ПДК в воздухе рабочей
зоны проводится с использованием следующих формул:
lg ОБУВ = 0,67lg ПДК - 1,7 (W = 1,0). (32)
р.з.
Кроме того следует использовать формулы, учитывающие класс
опасности ЛС в воздухе рабочей зоны:
для ЛС 1 класса опасности:
lg ОБУВ = 1,35lg ПДК - 0,641 (W = 1,0); (33)
р.з.
для ЛС 2 класса опасности:
lg ОБУВ = 0,1lg ПДК - 1,99 (W = 1,0); (34)
р.з.
для ЛС 3 класса опасности:
при ПДК >= 2:
р.з.
ОБУВ = -0,00599 + 0,0115ПДК (W = 1,0); (35)
р.з.
при ПДК < 2:
р.з.
ОБУВ = 0,0218 + 0,00772ПДК (W = 1,0); (36)
р.з.
для ЛС 4 класса опасности:
_______ 2
ОБУВ = (0,112 + 0,0649 \/ПДК ) (W = 1,0). (37)
р.з.
3.3.4. Расчет величины ОБУВ по значениям МСТД и ВСТД (в г)
проводится с применением следующих уравнений:
lg ОБУВ = 0,52lg МСТД - 1,46 (W = 0,73); (38)
lg ОБУВ = 0,68lg ВСТД - 1,72 (W = 0,8); (39)
МСТД (мг) K
1
ОБУВ (мг/куб. м) = ------------ (W = 0,75); (40а)
20K
4
ВСТД (мг) K
1
ОБУВ (мг/куб. м) = ------------ (W = 0,75), (40б)
20K
5
где:
20 - суточный объем легочной вентиляции (куб. м);
K - коэффициент, отражающий степень задержки аэрозоля в
1
организме (в долях единицы), при отсутствии данных K = 1,0;
1
K - коэффициент перехода от МСТД к допустимому уровню
4
воздействия, рекомендуемый на уровне 800;
K - коэффициент перехода от ВСТД к допустимому уровню
5
воздействия, рекомендуемый на уровне 2500.
Вышеприведенные формулы 40а и 40б целесообразно использовать
для прогнозирования гигиенических нормативов ЛС, имеющих
нормированные в атмосферном воздухе аналоги. Предварительно
проводится расчет коэффициентов K и K для ранее исследованных ЛС
4 5
и затем полученная величина используется для прогнозирования
гигиенических нормативов других представителей данной
фармакологической группы.
3.3.5. Расчет ОБУВ по значениям параметров токсикометрии:
lg ОБУВ = 0,64lg Lim - 2,67 (W = 0,46); (41)
ac
lg ОБУВ = 0,48lg Lim + 0,61lg K - 3,0 (W = 0,5); (42)
аc кум
lg ОБУВ = 0,42lg МСТД + 0,16lg ЛД50 в/бр -
- 2,01 (W = 0,8). (43)
3.3.6. При обосновании ОБУВ полупродуктов синтеза
лекарственных препаратов наряду с уравнениями 32 - 37, 41, 42
могут использоваться следующие уравнения:
lg ОБУВ = 0,53lg ЛД50 в/ж + 0,56lg K -
кум
- 3,8 (W = 0,35); (44)
lg ОБУВ = 0,23lg ЛД50 в/ж + 0,33lg Lim +
ac
+ 0,55lg K - 3,56 (W = 0,5). (45)
кум
Следует также руководствоваться МУ [28].
3.4. Полная токсикологическая оценка
3.4.1. Полная токсикологическая оценка с хроническим
экспериментом проводится в соответствии с п. 3.1.1 настоящих МУ, а
также [2, 26]. Выбор концентраций для проведения хронического
ингаляционного эксперимента осуществляется с учетом величин Lim ,
ac
ОБУВ (раздел 3.3), а также прогнозируемой величины порога
хронического действия в условиях круглосуточного эксперимента:
lg Lim = 0,71lg ПДК - 0,98; (46)
ch р.з.
lg Lim = 0,16lg ЛД50 + 0,42lg Lim +
ch ac
+ 0,65lg K - 2,65. (47)
кум
3.4.2. Условия эксперимента должны соответствовать требованиям методических указаний по обоснованию ПДК загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест [2].
В связи с тем, что большинство ЛС представляют собой вредные вещества, находящиеся в воздухе в виде аэрозоля дезинтеграции, необходимо обращать особое внимание на точность дозирования поступления ЛС в затравочные камеры и поддержание относительно стабильных концентраций. Предпочтительным является использование автоматических систем поддержания заданных концентраций аэрозоля в затравочных камерах. Дисперсность исследуемого аэрозоля должна соответствовать размерам частиц ЛС, находящихся в атмосферном воздухе. При отсутствии данных натурных наблюдений в эксперименте целесообразно исследовать образцы аэрозоля ЛС с дисперсностью от 0,1 до 10 мкм, при этом частиц с диаметром 10 мкм должно быть не более 5%, размером 2 мкм не менее 85% от массы всех частиц.
3.4.3. При определении порога хронического действия ЛС наряду с интегральными показателями необходимо исследовать специфические показатели, характеризующие его избирательное фармакологическое и побочное токсическое действие. При этом используются физиологические, биохимические, гематологические методы, адекватные механизму фармакологического действия изучаемого ЛС и спектру его побочного действия (раздел 2, Приложения 3 и 4).
3.4.4. При изучении комбинированных ЛС, содержащих два или более компонента, необходимо исследовать токсичность каждого из компонентов отдельно, а также токсичность всей комбинации в целом. Общие принципы подобных исследований представлены в методических рекомендациях к постановке экспериментальных исследований по изучению характера комбинированного действия химических веществ [39]. В том случае, когда комбинированный эффект препарата обусловлен преимущественно действием одного (или нескольких, обладающих одинаковым фармакологическим действием) ЛС, гигиенический норматив устанавливается по данному веществу. Аналогичный подход используется при гигиеническом нормировании многокомпонентных препаратов постоянного состава, содержащих ранее не нормированные ингредиенты. Подобную смесь правомерно рассматривать как одно вещество и исследовать ее с применением обычной схемы гигиенического нормирования. Контроль за содержанием препарата в затравочных камерах и последующее обоснование гигиенического норматива проводится по наиболее активному лекарственному веществу.
3.4.5. В результате хронического эксперимента должны быть
установлены пороговая и недействующая концентрации по интегральным
и специфическим показателям, определена зона специфического
действия, класс опасности, выявлены органы и системы организма,
чувствительные к действию исследуемого вещества. В связи с тем,
что большинство исследованных ЛС обладают преимущественно
резорбтивным действием, для них необходимо устанавливать
среднесуточную ПДК (ПДК устанавливается от порога хронического
действия с учетом K ) и в дополнение к ней максимальную разовую
з
концентрацию на уровне 98% вероятности ее появления в хроническом
эксперименте. Минимальные различия между максимально разовой и
среднесуточной концентрациями должны составлять не менее 2,5 [2].
4. Гигиеническое нормирование
лекарственных средств в воде водных объектов
4.1. Схема этапного обоснования нормативов ЛС в воде
Научной основой для определения оптимального объема исследований служит схема этапного нормирования ([33], Приложение 5).
Составной частью схемы является классификация опасности веществ, загрязняющих воду (Приложение 6).
4.2. Физико-химическая характеристика вещества
Для определения объема, условий и цели исследования необходимо получить производственную и физико-химическую характеристику лекарственного препарата.
Особое внимание уделяется показателям растворимости, стабильности и параметрам, используемым для прогноза токсичности и опасности веществ. Необходимо указать примеси, т.к. они могут оказать влияние на токсичность и органолептические свойства.
4.3. Оценка стабильности и трансформации ЛС в водной среде
Цель исследования стабильности и трансформации веществ - уточнение класса опасности, величины норматива и определение химического ингредиента, подлежащего текущему санитарному контролю в воде. Дополнительно эти исследования могут позволить уточнить методы очистки сточных вод от изучаемого вещества.